Прямая проба кумбса положительная как лечить. Реакция Кумбса непрямая (антиглобулиновый тест, выявление неполных антиэритроцитарных антител), кровь. Для выявления риска резус-сенсибилизации

по применению «Набора реагентов для определения антигенов и антител системы Резус крови человека»
(АГС для пробы Кумбса)

ТУ 9398-102-51203590-2012

РУ № РЗН 2013/1255 от 11.10.2013

I. ВВЕДЕНИЕ

Стандартная сыворотка для пробы Кумбса содержит специфические гетероиммунные антитела против белка крови человека и предназначена для использования в двух вариантах реакции – прямой и непрямой пробе Кумбса.

Прямая проба Кумбса применяется для определения сенсибилизации эритроцитов in vivo при гемолитической болезни новорожденнных и у больных с аутоиммунной формой хронической гемолитической анемии а также при некоторых других состояниях. Проведение прямой пробы Кумбса заключается в том, что к исследуемым эритроцитам, предварительно отмытым от белков собственной плазмы, добавляется сыворотка для пробы Кумбса. Если эритроциты были сенсибилизированы in vivo, то в результате реакции происходит их агглютинация.

Непрямая проба Кумбса применяется как проба для выявления состояния сенсибилизации организма, позволяющая выявлять антитела, находящиеся в свободном состоянии в сыворотке крови исследуемого лица; как проба на совместимость переливаемой крови, когда исследуется воздействие сыворотки реципиента на эритроциты предполагаемого донора; и как проба для определения различных групповых антигенов в эритроцитах при помощи предварительного воздействия на них стандартных сывороток, содержащих антитела заведомо известной специфичности. Непрямая проба Кумбса (все варианты) производится в два этапа, первым из которых является инкубация исследуемой (или стандартной) сыворотки со стандартными (или исследуемыми) эритроцитами, т. е. сенсибизация эритроцитов in vitro. Второй этап – собственно реакция с сывороткой для пробы Кумбса, которая производится так же, как прямая проба Кумбса.

Конечный результат реакции как в прямой, так и в непрямой пробе Кумбса происходит за счет взаимодействия стандартной сыворотки для пробы Кумбса, с антителами (белком крови человека), фиксированными на эритроцитах. Этот результат проявляется в виде агглютинации эритроцитов. Для наблюдения за агглютинацией следует использовать белую фарфоровую или любую белую пластинку обязательно со смачиваемой поверхностью для того, чтобы наносимые на нее капли хорошо размешивались и не растекались по поверхности пластинки. Перемешанные капли следует слегка размазать по пластинке, приблизительно до размера 2-х копеечной монеты.
II. ПОДГОТОВКА ИНГРЕДИЕНТОВ РЕАКЦИИ

Исследуемую сыворотку для определения в ней наличия и специфичности антител получают из крови обследуемого лица без добавления консерванта. Хранят при температуре + 4–8 0 С не более 2 суток или в замороженном состоянии – срок 1 месяц.

Сыворотку для пробы на совместимость получают таким же способом, но используют со сроком хранения не более 2 суток.

Эритроциты, предназначенные для определения в них тех или иных изоантигенов, заготавливаются с каким-либо консервантом от лица, кровь которого исследуется. Можно также использовать осадок эритроцитов из крови, взятой без консерванта.

При пробе на совместимость используется кровь донора, спущенная через иглу из флакона, приготовленного для переливания.

Во всех случаях эритроциты 3-4 раза отмываются в пробирках от плазмы, путем добавления к одному объему эритроцитов 8-10 объемов изотонического раствора хлорида натрия, с последующим перемешиванием и центрифугированием при 1500-2000 об/мин в течение 5-10 мин (до полного осаждения эритроцитов). После каждого центрифугирования надстой отсасывается.
III. ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ РЕАКЦИЙ

Испытуемые эритроциты готовят в виде 5% взвеси, для чего одну каплю четырежды отмытых эритроцитов смешивают в пробирке с 19 каплями изотонического раствора хлорида натрия.

Одну каплю (0,05 мл) 5% взвеси эритроцитов переносят на белую пластинку и размазывают. Пластинку покачивают и в течение 3-х минут наблюдают, не наступила ли агглютинация эритроцитов. Если агглютинация не наступила, то сюда же добавляют 1-2 капли стандартной сыворотки для пробы Кумбса, капли тщательно перемешивают, после чего пластинку слегка покачивают, затем на одну-две минуты оставляют в покое и снова покачивают. Одновременно в течение 10 минут ведут наблюдение за результатом, который выражается в наличии или отсутствии агглютинации.
Трактовка результатов прямой пробы Кумбса.

Отсутствие агглютинации – отрицательная проба

Наличие агглютинации – положительная проба, что указывает на сенсибилизацию исследуемых эритроцитов, т. е. на абсорбцию на них антител, происшедшую in vivo в организме человека (новорожденного, больного). Если агглютинация исследуемых эритроцитов наступила до добавления к ним сыворотки для пробы Кумбса, результат прямой пробы не учитывается.
2. Непрямая проба Кумбса

Предназначенная для выявления изоантител в сыворотке крови обследуемого лица

Применяется в тех случаях, когда необходимо выяснить, содержатся ли в крови больного, беременной женщины, донора и т. д. изоиммунные антитела неполной формы и установить их специфичность. Для реакции используют сыворотку крови обследуемого лица и стандартные эритроциты заведомо известной специфичности. Среди этих 8-10 или более образцов эритроцитов должны быть различия по факторам других систем и очень важно, чтобы каждый из этих факторов содержался хоты бы в одном образце эритроцитов. Также в панель включаются образцы резус-отрицательных эритроцитов с различными сочетаниями антигенов других систем, так, чтобы среди них имелись Даффи-положительные и Даффи-отрицательные, которые, в свою очередь, делились бы на Келл-положительные и Келл-отрицательные, Кидд-положительные и Кидд-отрицательные и т. д. В качестве отрицательного контроля в реакцию по возможности включают эритроциты того лица, сыворотка которого исследуется.

Техника реакции

1 каплю 5% взвеси эритроцитов из каждой пробирки переносят на белую пластинку, добавляют туда 1-2 капли стандартной сыворотки для пробы Кумбса и тщательно перемешивают сыворотку с эритроцитами. Пластинку слегка покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают, одновременно наблюдая за результатом реакции в течение 20 минут.

Трактовка результатов

Если в некоторых или в большинстве капель, кроме контроля, наблюдается агглютинация , это значит, что в исследуемой сыворотке содержатся неполные антитела против антигенов эритроцитов. Вопрос о специфичности этих антител решается по сопоставлению положительных и отрицательных реакций с антигенной структурой эритроцитов, включенных в реакцию. Вопрос об активности этих антител решается титрованием.

Пример 1. Агглютинация имела место со всеми образцами эритроцитов, содержащими фактор Rh 0 (D), независимо от наличия и от отсутствия других факторов этой системы и других систем, в то время, как со всеми Rh 0 (D) – отрицательными образцами агглютинации не наблюдалось (так же независимо от наличия или отсутствия других факторов) – это значит, что в исследуемой сыворотке содержатся неполные антитела анти-резус – Rh 0 (D).

Пример 2 . Агглютинация имела место со всеми образцами эритроцитов, содержацими фактор Даффи, независимо от наличия или отсутствия антигенов системы резус и других систем, в то время, как со всеми Даффи-отрицательными образцами агглютинации не наблюдалось, это значит, что в исследуемой сыворотке содержатся неполные антитела анти-Даффи.

Дополнение. В случае, если в учреждении не имеется полной панели стандартных эритроцитов, но есть необходимость в исследовании сыворотки на наличие антител, рекомендуется провести исследование с 25-30 произвольно взятыми образцами эритроцитов здоровых лиц группы 0 (I) или одноименной с исследуемой сывороткой. Это даст возможность решить вопрос о наличии или отсутствии антител к большинству антигенов системы Rh-Hr, Даффи, Келл, Кидд.

При получении положительного результата дальнейшее заключение о специфичности выявленных антител может быть решено при специальном исследовании с полной панелью стандартных эритроцитов.

3. Техника проведения непрямой пробы Кумбса, как пробы на совместимость переливаемой крови

Для предупреждения несовместимости при переливании крови, перед трансфузией обязательно должны быть произведены следующие пробы на совместимость:

1. 
   Проба на совместимость по группам крови АВО, которая производится на плоскости при комнатной температуре.
2. 
   Пробы на совместимость по резус-фактору и другим изоантигенам.

Одну маленькую (0,01 мл) каплю отмытых эритроцитов донора, взятых через иглу из флакона с кровью, предназначенной для переливания, переносят на дно центрифужной или другой пробирки объемом 3-4 мл и добавляют в нее 3 капли сыворотки больного. Пробирку встряхивают для перемешивания эритроцитов с сывороткой, после чего помещают в термостат при 37 0 С на 45 мин. После инкубации добавляют в пробирку доверху изотонический раствор хлорида натрия, содержимое пробирки перемешивают и центрифугируют 5-10 мин. Такое отмывание эритроцитов повторяют 3 раза, каждый раз тщательно удаляя надстой. При использовании центрифужных пробирок можно ограничиться двухкратным отмыванием. К отмытым эритроцитам добавляют 2 капли изотонического раствора хлорида натрия для получения приблизительно 5% взвеси.

1 каплю 5% взвеси эритроцитов переносят на белую пластинку, добавляют туда 1-2 капли стандартной сыворотки для пробы Кумбса и тщательно перемешивают сыворотку с эритроцитами. Затем пластинку слегка покачивают, на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают, одновременно наблюдая результат в течение 20 минут.

Примечание: При несовместимости по резус-фактору агглютинация обычно наступает в течение первой минуты, однако при низком титре резус-антител (или других антител) агглютинация может наступить позже, иногда к двадцатой минуте.
Трактовка результата:

Агглютинаты видны в виде комочков на просветленном или полностью обесцвеченном фоне – это значит, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не может быть ему перелита.

Отсутствие признаков агглютинации означает, что кровь больного не содержит неполных антител к эритроцитам донора в отношении резус-фактора и других изоантигенов, к которым могли образоваться антитела неполной формы.

Непрямая проба Кумбса является чувствительной только в отношении неполных антител.
4. Техника непрямой проба Кумбса для определения антигенной структуры эритроцитов

Данная проба используется для определения наличия или отсутствия какого-либо группового антигена эритроцитов при помощи стандартной сыворотки, содержащей соответствующие антитела в неполной форме.

Наиболее часто непрямая проба Кумбса используется при определении антигенов Келл (К), Даффи (Fy), Кидд (Jk), и также для определения слабого антигена системы резус (Du).

Прежде, чем приступить к определению антигенов, исследуемые эритроциты следует проверить в прямой пробе Кумбса. При положительном результате прямой пробы – определение антигенов непрямой пробой Кумбса провести нельзя и для этой цели нужно применить другие реакции.

Для реакции используют центрифужние или другие пробирки объемом 3-4 мл в количестве трех: одну – для исследуемого образца эритроцитов и две для На дно первой пробирки вносят 1 маленькую (0,01 мл) каплю трижды отмытых испытуемых эритроцитов, во вторую - контрольные эритроциты, содержащие искомый антиген (например, Даффи- положительные) и в третью пробирку – отрицательный контроль (Даффи – отрицательные). Во все пробирки добавляют по 2-3 капли стандартной сыворотки (в данном примере анти-Даффи). Пробирки встряхивают для перемешивания содержимого и помещают в термостат при 37 0 С на 45 мин. После такой инкубации пробирки вынимают из термостата, доливают в них доверху изотонический раствор хлорида натрия, тщательно перемешивают содержимое и центрифугируют при1500-2000 тыс. об/мин в течение 5-10 мин. После центрифугирования надстой тщательно отсасывают и такое отмывание эритроцитов повторяют 4 раза. (При использовании центрифужных пробирок можно ограничиться двухкратным отмыванием).

К отмытым эритроцитам добавляют 2 капли изотонического раствора хлорида натрия для получения приблизительно 5% взвеси. 1 каплю 5% взвеси эритроцитов из каждой пробирки переносят на белую пластинку, к каждой капле эритроцитов добавляют 1-2 капли стандартной сыворотки для пробы Кумбса и перемешивают. Пластинку слегка покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают, одновременно наблюдая за ходом реакции в течение 20 минут.
Трактовка результатов

Наличие агглютинации эритроцитов (положительный результат) означает, что кровь содержит искомый антиген (в данном примере – кровь Даффи-положительная).

Отсутствие агглютинаци (отрицательный результат) означает, что исследуемая кровь не содержит искомого антигена (Даффи-отрицательная).

Результат учитывается как истиный после проверки контрольных образцов, т. е. в примере при положительном результате с Даффи-положительным образцом и отрицательном – с Даффи-отрицательным образцом.

5. Форма выпуска

Реактив выпускается в жидкой форме во флаконах объемом 5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

6.Хранение

Срок хранения - два года в холодильнике при 2-8°С. Вскрытый флакон годен к использованию при хранении в холо­дильнике в герметично закрытом виде в течение всего срока годности.

Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостнос­ти флакона, наличие хлопьев, истекший срок годности реагента. При составлении рекламации просим указать дату получения, поставщика (если Вы получили товар не от производителя), номер серии, причины, по которым реагент признан негодным. Просим приложить протокол с результатами проверки реагента и 2-3 невскрытых флакона с реактивом
Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель ООО «МЕДИКЛОН»: 127276

Проба Кумбса - это специфический лабораторный тест, который позволяет определить антитела, находящиеся в или на поверхности эритроцита. Данная процедура позволяет диагностировать иммунную в том числе у новорожденных, а также выявить гемолитические трансфузионные реакции. Проба Кумбса активно применяется в судебной медицине и научной генетике с целью определения эритроцитарных антигенов. Соблюдение всех правил осуществления такого анализа позволяет получить максимально достоверный результат.

Цель антиглобулинового теста

Проба Кумбса прямая позволяет обнаружить антиэритроцитарные антитела, которые фиксируются на эритроцитах. Положительная реакция при подобном исследовании указывает на развитие аутоиммунной Следует отметить, что отрицательный результат не исключает наличия поскольку антитела нередко находятся в свободном виде, то есть не имеют связи с эритроцитами. В таких случаях целесообразно провести непрямую пробу Кумбса, которая позволит определить автономные вещества в

Как проводится анализ?

абор венозной крови у пациента осуществляют утром натощак, несмотря на то, что каких-либо существенных факторов, влияющих на конечный результат подобного теста, не обнаружено. Хранить взятый материал разрешается при температуре от 2 до 8 °С не дольше семи дней. Для того чтобы показатели данного исследования были максимально точны, цельную кровь в течение первых двух часов необходимо доставить в лабораторию. В идеале проба Кумбса должна показывать отрицательный результат, что указывает на отсутствие гемолитических изменений в организме.

Расшифровка итоговых показателей

Проба Кумбса является достаточно трудоемким методом исследования, который требует тщательного и точного выполнения. При использовании такого теста могут встречаться некоторые сложности, которые связаны с неправильной интерпретацией окончательных результатов по причине слабого проявления положительных реакций. Следует отметить, что недостоверность анализа - а именно положительная проба Кумбса - может стать следствием неэффективной отмывки эритроцитов, контакта с жирной
поверхностью, а также нейтрализации антиглобулиновых реагентов компонентами

сыворотки. Еще одним недостатком такого метода исследования является нестойкость взятого материала, хранение которого имеет определенные особенности.

Причиной ложноотрицательного результата может стать чрезмерное встряхивание взвеси эритроцитов при ресуспендировании. Ошибочные результаты могут быть также обусловлены присутствием примесей антикомплементарных антител, которые адсорбируются при инкубации на поверхности тестируемых эритроцитов, в результате чего создается видимость положительного результата. Если тщательно отмывать исследуемые образцы и контролировать условия проведения реакции, указанные недостатки могут быть легко устранены, что повысит шансы на получение максимально достоверных показателей пробы Кумбса.

– антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня. Всего в Москве нашлось 87 адресов, где можно сделать этот анализ.

– антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня.

Тест Кумбса – клиническое исследование резус-отрицательной крови, направленное на обнаружение антител к резус-фактору. Проба используется для выявления риска развития резус-конфликта и гемолитических реакций. У каждого человека поверхность эритроцитов содержит определенный набор антигенов или агглютиногенов – соединений различной природы, по наличию или отсутствию которых судят о группе крови и резус-факторе. Существует множество видов антигенов, в медицинской практике наибольшее практическое значение имеют агглютиногены A и B, определяющие группу крови, и агглютиноген D – резус-фактор. При положительном резус-факторе на внешней мембране эритроцитов определяются антигены D, при отрицательном – нет.

Тест Кумбса, который также называют антиглобулиновой пробой, направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешении крови плода и беременной, при гемотрансфузиях , проведенных без предварительного типирования крови. Тест Кумбса существует в двух вариантах – прямой и непрямой. При выполнении прямого теста Кумбса выявляются антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов. Исследование используется для установления причины гемолитической реакции. Непрямой тест Кумбса направлен на выявление антиэритроцитарных антител в плазме крови. Он необходим для определения совместимости крови донора и реципиента или матери и плода, позволяет предупредить развитие резус-конфликта и последующего гемолиза эритроцитов.

Кровь для проведения обоих вариантов теста Кумбса берется из вены. Анализ выполняется методом агглютинации с использованием антиглобулиновой сыворотки. Результаты исследования находят применение в гематологии при выявлении причин гемолитических реакций, в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий, в акушерстве и гинекологии при мониторинге беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью.

Показания

Прямой тест Кумбса, выявляющий антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов, назначается при гемолитических реакциях (разрушении эритроцитов) различного происхождения. Исследование показано при первичной аутоиммунной гемолитической анемии , посттрансфузионной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденного , гемолизе эритроцитов, вызванном аутоиммунными, опухолевыми или инфекционными заболеваниями, а также приемом лекарственных средств, например, хинидина, метилдопы, прокаинамида. Непрямой тест Кумбса, определяющий антитела в плазме крови, используется для предупреждения развития резус-конфликта. Он показан пациентам при подготовке к гемотрансфузиям, а также беременным с отрицательным резус-фактором при условии, что будущий отец ребенка имеет положительный резус-фактор.

С целью определения резус-совместимости тест Кумбса не назначается пациентам с резус-положительной кровью. В этих случаях на поверхности эритроцитов уже имеются антигены, выработка антител не может быть спровоцирована гемотрансфузией или попаданием крови плода в кровоток беременной. Также исследование не показано беременным женщинам, если оба родителя имеют отрицательный резус-фактор – передающийся по наследству рецессивный признак. Ребенок в таких парах всегда имеет резус-отрицательную кровь, иммунологический конфликт с матерью невозможен. При гемолитических патологиях антиглобулиновая проба не используется с целью контроля успешности терапии, так как результаты не отражают активность процесса разрушения эритроцитов.

Ограничением теста Кумбса является трудоемкость процедуры исследования – для получения достоверных результатов необходимо соблюдение температурных и временных режимов, правил подготовки реагентов и биоматериала. К преимуществам теста Кумбса относится его высокая чувствительность. При гемолитической анемии результаты этого анализа остаются положительными, даже если показатели гемоглобина , билирубина и ретикулоцитов нормализуются.

Подготовка к анализу и забор материала

Материалом для выполнения теста Кумбса является венозная кровь. Специальных требований ко времени проведения процедуры забора крови и к подготовке пациента нет. Как и при любом исследовании рекомендуется выдержать перерыв после приема пищи не менее 4 часов, а в последние 30 минут отказаться от курения, физических нагрузок, избегать эмоционального напряжения. Также стоит заранее обсудить с врачом необходимость отмены принимаемых лекарств – некоторые препараты могут исказить результаты теста Кумбса. Кровь берут с помощью шприца из локтевой вены, реже из вены на тыльной стороне кисти. В течение нескольких часов материал доставляется в лабораторию.

При выполнении прямого теста Кумбса к сыворотке крови пациента добавляется антиглобулиновая сыворотка. Через некоторое время смесь исследуется на наличие агглютинатов – они образуются, если на эритроцитах есть антитела. При положительном результате определяется агглютинирующий титр. Непрямой тест Кумбса состоит из большего количества этапов. Сначала антитела, находящиеся в сыворотке, в ходе инкубации фиксируются на введенных эритроцитах. Затем к образцу добавляется антиглобулиновая сыворотка, через некоторое время определяется наличие и титр агглютинатов. Сроки выполнения анализа – 1 день.

Нормальные результаты

В норме результат прямой теста Кумбса отрицательный (-). Это означает, что в крови нет антител, связанных с эритроцитами, и они не могут быть причиной гемолиза. Нормальный результат непрямого теста Кумбса тоже отрицательный (-), то есть антитела к резус-фактору в плазме крови отсутствуют. При подготовке к гемотрансфузии для реципиента это означает совместимость с кровью донора, при мониторинге беременности – отсутствие резус-сенсибилизации матери, низкий риск развития иммунологического конфликта. Физиологические факторы, такие как особенности питания или физической активности, не могут повлиять на результат пробы. Поэтому если результат положительный, необходима консультация врача.

Диагностическое значение анализа

Положительный результат теста Кумбса выражается качественно, от (+) до (++++), либо количественно, титрами от 1:16 до 1:256. Определение концентрации антител на эритроцитах и в сыворотке крови выполняется в обоих видах пробы. При положительном результате прямого теста Кумбса на внешней мембране эритроцитов выявляются антитела, которые приводят к разрушению этих клеток крови. Причиной может стать переливание крови без предварительного типирования – посттрансфузионная гемолитическая реакция, а также эритробластоз новорожденного, гемолитическая реакция вследствие применения лекарств, первичная или вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия. Вторичное разрушение эритроцитов может быть вызвано системной красной волчанкой , синдромом Эванса, макроглобулинемией Вальденстрема, пароксизмальной холодовой гемоглобинурией , хроническим лимфолейкозом , лимфомой, инфекционным мононуклеозом , сифилисом , микоплазменной пневмонией .

Положительный результат непрямого теста Кумбса указывает на наличие в плазме антител к резус-фактору. На практике это означает, что произошла резус-сенсибилизация, существует возможность развития резус-конфликта после вливания крови донора, во время беременности. Для предупреждения осложнений беременности женщины с положительным результатом теста Кумбса ставятся на специальный учет.

Лечение отклонений от нормы

Тест Кумбса относится к изосерологическим исследованиям. Его результаты позволяют выявить гемолитическую реакцию, а также определить совместимость крови донора и реципиента, матери и плода, чтобы предупредить развитие резус-конфликта. Если результат пробы положительный, то необходимо обратиться за консультацией к лечащему врачу – акушеру-гинекологу, гематологу, хирургу .

Проба Кумбса – это клинический анализ крови, который проводится, чтобы выявить, содержит ли кровь определенные антитела, которые могут быть небезопасны. Эти антитела приклеиваются к эритроцитам и могут вторгнуться в иммунную систему, а также нанести вред другими способами. В медицинской терминологии это исследование также называют антиглобулиновым тестом (АГТ).

Типы проб Кумбса

Существует два типа проб Кумбса – прямой и непрямой.

Прямая проба Кумбса , также известная как прямой (ПАТ), выявляет ауто-антитела, которые прикрепляются к поверхности эритроцитов. Эти антитела иногда производятся в организме вследствие определенных заболеваний или при приеме определенных медикаментов, таких как прокаинамид, метилдопа или хинидин.

Данные антитела опасны, потому что иногда они вызывают анемию, разрушая эритроциты.

Данный тест иногда назначается для диагностики причины желтухи или анемии.

В норме реакция Кумбса отрицательная.

Положительно при:

• гемолитической болезни новорожденных;
• аутоиммунном гемолизе;
• гемолитических трансфузионных реакциях;
• лекарственной иммунной гемолитической анемии.

Непрямая проба Кумбса , также известная как , используется для обнаружения антител к эритроцитам, содержащимся в сыворотке крови (сыворотка – это прозрачная желтая жидкость крови, которая остается после того, как выводятся красные кровяные тельца и коагулянт).

Непрямая проба Кумбса применяется при переливании крови для определения того, совпадает ли кровь донора с кровью реципиента. Это называется пробой на совместимость, она помогает предотвратить любую неблагоприятную реакцию на кровь донора. Данный анализ также рекомендован беременным женщинам. Некоторые женщины имеют антитела класса IgG, которые могут проникать через плаценту в кровь плода и нанести вред новорожденному, вызвав гемолитическое заболевание, известное как гемолитическая анемия.

Процедура

Кровь берется посредством шприца из вены, обычно с тыльной стороны ладони или на сгибе локтя. Место прокола пред этим тщательно дезинфицируется, а после взятия анализа крови накладывается чистая марля или вата.

Полученная кровь очищается в лаборатории, при этом отделяются красные кровяные тельца. Образец затем последовательно исследуется с применением различных реагентов сыворотки и Кумбса, который противопоставляется . Если не случается агглютинации (слипания красных кровяных телец), это означает положительный результат.

Однако если тест отрицательный, это означает, что в крови имеются антитела, которые действуют против эритроцитов. Это может указывать на различные заболевания, такие как анемия (как естественная, так и спровоцированная приемом медикаментов), сифилис, или микоплазменная инфекция. После получения результатов лечащий врач назначит соответствующее лечение.

Видео

Прямая проба Кумбса (прямой антиглобулиновый тест) - это лабораторный тест, который выявляет антиэритроцитарные антитела, фиксированные на эритроцитах.

Показания к исследованию

Какие показания к исследованию: установление иммунной природы гемолитической анемии.

Подготовка к исследованию

Как подготовиться к исследованию:

1. Если пациент — новорожденный, родителям следует объяснить, что исследование поможет диагностировать ГБН (гемолитическую болезнь новорожденных).

2. Если у пациента подозревают гемолитическую анемию, ему следует объяснить, что исследование позволит выяснить, обусловлена ли она иммунными нарушениями, приемом препаратов или другими причинами.

3. Каких-либо ограничений в диете или режиме питания не требуется.

4. Следует предупредить пациента (или родителей новорожденного), что для исследования понадобится взять кровь из вены, и сообщить ему, кто и когда будет делать венепункцию.

5. Следует предупредить о возможности неприятных ощущений во время наложения жгута на руку и венепункции.

6. Препараты, которые могут повлиять на результат пробы, следует отменить. К ним относятся хинидин, метилдофа, цефалоспорины, сульфаниламиды, хлорпромазин, дифенилгидантоин, этосуксимид, гидралазин, леводопа, мефенаминовая кислота, мелфалан, пенициллин, прокаинамид, рифампин, стрептомицин, тетрациклины, изониазид.

Забор крови осуществляют в утренние часы натощак.

Материал для анализа

Материал для анализа:

Проведение процедуры

Как проходит процедура забора крови:

1. При проведении пробы у взрослого пациента после венепункции набирают кровь в пробирки с ЭДТА.

2. У новорожденных берут кровь из пуповины в пробирку с ЭДТА.

3. Место венепункции придавливают ватным шариком до остановки кровотечения.

4. При образовании гематомы в месте венепункции назначают согревающие компрессы.

5. После взятия крови пациент может возобновить прием отмененных препаратов.

6. Следует предупредить родителей новорожденного, что для контроля за динамикой анемии, возможно, потребуется повторное исследование.

Метод проведения прямой пробы Кумбса:

Она проводится следующим образом:

Для получения антител к человеческим иммуноглобулинам (антиглобулиновой сыворотки) или комплементу (антикомплементарной сыворотки) животное иммунизируют человеческой сывороткой, иммуноглобулинами или комплементом человека. Полученную от животного сыворотку очищают от антител к другим белкам.

Эритроциты больного отмывают физиологическим раствором для полного удаления сыворотки, которая нейтрализует антитела к иммуноглобулинам и комплементу и может стать причиной ложноотрицательного результата.

Если на поверхности эритроцитов фиксированы антитела или компоненты комплемента, добавление антиглобулиновой или антикомплементарной сыворотки вызывает агглютинацию эритроцитов.

Преимущества и недостатки

Какие преимущества и недостатки прямой пробы Кумбса:

Преимущества исследования: высокая чувствительность, значительно превосходящая разрешающую способность альтернативных методов исследования, которые используются для выявления неагглютинирующих антител.

Недостатки исследования:

Прямая проба Кумбса - трудоемкий метод исследования, требующий особой тщательности в выполнении. При ее использовании встречаются некоторые затруднения, связанные, в частности, с интерпретацией слабоположительных реакций. Известно, что ложные слабоположительные или отрицательные реакции при выполнении проб Кумбса могут быть следствием недостаточно эффективной отмывки эритроцитов, нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки, а также контакта с необезжиренной поверхностью, на которой может фиксироваться антиглобулин, теряя при этом свою активность.

Еще один недостаток пробы Кумбса — нестойкость антиглобулинового реагента, получение и хранение которого имеют определенные особенности, что также делает затруднительной количественную оценку реакции гемагглютинации с антиглобулиновой сывороткой.

Факторы, влияющие на результат исследования

Какие факторы могут повлиять на результат исследования:

1. Гемолиз, обусловленный неосторожным обращением с пробой крови.

2. Ацетаминофен, p-салициловая кислота, аминопирин, антигистаминные препараты, карбромал, цефалоспорины, хлорированные углеводные инсектициды, хлорпромазин, хлорпропрамид, цисплатин, клонидин, дипирон, этосуксимид, фенфлюрамин, фуадин, гидралазин, гидрохлортиазид, ибупрофен, инсулин, изониазид, леводофа, мефенаминовая кислота, мелфалан, метадон, метилдофа, метилсергид, номифензин, пеницилламин, пенициллины, фенацетин, фенилбутазон, пробенецид, прокаинамид, хинидин, хинин, рифампин, стрептомицин, сульфонамиды, производные сульфонилмочевины, тетрациклин, триамтерен, тримеллитиновый ангидрид.