Серологические исследования крови для диагностики сифилиса. Экспресс-тест на сифилис, или как определить сифилис в домашних условиях. Рпга-реакция пассивной гемагглютинации

Сифилис – это опасное венерическое заболевание, которое вызвано бледной трепонемой, передается половым путем и способно поражать все органы и системы организма. В настоящее время при своевременной диагностике и проведенной терапии стало возможным полное излечение сифилиса.

Диагностирование этого недуга основывается на лабораторных и клинических данных.

Виды серологических реакций на сифилис

Среди лабораторных исследований особенно ценится серологический анализ, который требуется не только для диагностирования недуга, но и для изучения общей картины влияния лечебных мер на болезнь, изучение эффективности терапии.

Серологическая реакция на сифилис стала отдельной отраслью медицины. Стоит заметить, что созданы различные типы такой диагностики, которые во многих странах официально признаны. При этом необходимо, чтобы врач имел достаточную квалификацию в области серологии, которая потребуется для правильного истолкования результатов.

На пространстве нашей страны для серологического исследования сифилиса применяют следующую инструкцию (утверждена в 1995 году):

1. КСР (комплекс серологических реакций). В этот список входит реакция связывания трепонемные, кардиолипиновые антигены с комплементами. Также микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном;

2. Трепонемные реакции. В их составе используются реакции бледных трепонем, и реакция иммунофлюоресценции.

Этот небольшой список мер, которые обязательны для серологического анализа сифилиса имеют различную «чувствительность», специфичность, и рекомендуются строго по отношению к каждому, отдельно взятому случаю и поставленной задачи. Теперь давайте подробнее.

Микрореакция преципитации. Особенности и результаты

Применяется при массовом обследовании населения на сифилис. Существуют разновидности – микрореакция на стеле, экспресс – метод диагностики сифилиса, для чего используется как сыворотка крови обследуемых, так и плазма. Эта реакция возникает при контакте со специфическим кардиолипиновым антигеном.

Как правило, результат проведенного анализа оценивается качественно - 4+, 3+,2+, отрицательный. В свою очередь, экспресс-метод позволяет получить результат уже через полчаса, и для исследования потребуется всего лишь несколько каплей плазмы крови, что берут с пальца пациентов.

Таким же способом обследуются те лица, которые поставлены на учет в венерологическом отделении. Если применять такую методику анализа локально, изолировано, то она представляет собой лишь отборочный тест.

На основании экспресс - теста нельзя точно сказать, что пациент больной сифилисом, но при положительном результате – врач может написать направление к дерматовенерологу. Этот специалист проведет дальнейшее обследование с помощью других методик – РИФ, УСР, РИБТ. Стоит также заметить, что экспресс-анализ не проверяют у беременных женщин, доноров, так как в большинстве случаев получается ошибочный, положительный результат. Зачастую экспресс – тест могут проводить медработники, прошедшие специальную подготовку, но изучение анализа и определение результатов обязаны лаборанты.

Реакция связывания комплимента или РСК

Реакция с кардиолипиновыми и трепонемными антигенами требуется для подтверждения первоначального диагноза (если экспресс-тест и МП показали положительный результат). Правда, такую процедуру рекомендуют применять, если имеются активные проявления, или же обследуемые лица были в половом контакте с зараженным сифилисом. Кроме того, подлежат диагностированию на РСК люди, у которых подозревается скрытый (латентный) сифилис. Естественно, реакцию на связывание комплимента назначают и для того, чтобы определить эффективность терапии.

Для обследования необходимо 5-7 миллилитров крови из локтевой вены. У грудничков кровь на анализ выбирают из височной вены, или из надреза на пятке.

Забор крови у пациента необходимо делать на «голодный желудок». Далее врач оставляет образец в сухой, чистой пробирке на 2-3 часа при комнатной температуре (это необходимо для свертывания). Постановку комплекса серологических реакций производят в специально подготовленных лабораториях.

Принцип действия описываемой реакции объясняется тем, что реагины, обнаруженные в сыворотке крови предположительно больных сифилисом, умеют вступать в реакцию с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы классифицируют введенное в реакцию вещество. Для индексирования КСР используется гемолитическая система (т.е. применяется смешение эритроцитов барана с гемолитической сывороткой).

Если случился КСР, то эритроциты выпадают в осадок, и такой процесс заметно невооруженным глазом. Выраженность реакции определяется врачом по такой классификации:

• 4+ Резко положительный.
• 3+ Положительный.
• 2+, 1+. Слабоположительный.
• Отрицательный.

Следует заметить, что кроме качественной оценки применяют количественную. Такая система оценивания требуется для того, чтобы определить стадию развития сифилиса, и эффективность проводимой терапии.

Впервые такой принцип исследования использовали в 1906 году Нейссер, Брук и Вассерман. В «роли» антигена они применили водный экстракт печени. В последующем времени, такую реакцию стали подставлять и под другие антигены, что сделало её еще более чувствительной. В настоящее время для постановки реакции советуют применять такие антигены:

• Кордилипиловый антиген (экстракт из сердца быка с избыточным количеством лецитина и холестерина).
• Трепонемный антиген (взвесь из апатогеннных культуральных трепонем, которая была обработана ультразвуковым излучением).

Реакция связывания этих антигенов достигает положительного результата через две – четыре недели с момента применения, и постепенно увеличивается, достигая максимума в титре, что наблюдается при появлении вторичного свежего сифилиса. Затем, титр специфических веществ постепенно снижается, и при рецидивной форме сифилиса, как правило, не превышает отметки в 1:180 – 1:120. Среди страдающих третичным проявлением сифилиса описанная реакция положительна в 70 процентах случаев.

Важно подметить, что комплекс серологических реакций не является исключительным показателем сифилиса в организме человека, и может дать неспецифические (ложноположительные) результаты. Правда, такое возникает, если специалист допустил ошибку в обследовании – некачественная процедура забора крови, грязные пробирки, низкая квалификация и пр.

Кроме того, ложноположительный результат чаще всего получают пациенты, страдающие лепрой, малярией, ситуационными недугами. Также получить ошибочный диагноз могут люди с туберкулезом, заболеваниями печени, а также те, которые принимают медикаменты. У женщин ложноположительный диагноз можно поставить, если пациентка беременна, или у неё критические дни.

• У младенцев на десятом дне жизни;
• При лихорадочных явлениях в течение двух недель после родов;
• Если у пациента есть свежие травмы, было хирургическое вмешательство, вакцинация.

А все потому, что физико-химические реакции в сыворотке крови при таких явлениях могут также показать ложноположительный результат на сифилис.

Реакция РИФ

Для того чтобы отличить ложноположительный от истинного результатов обследования КСР, в нашей стране применяет специфические серологические реакции, такие как РИФ и РИБТ. Также такой метод исследования рекомендован для диагностики формы заболевания, и при подозрении на сифилитическую инфекцию.

Для проведения данной процедуры потребуется количество крови в объеме 5-10 мл, которую также можно брать из локтевой вены на «голодный желудок». Полученную кровь вливают в сухую пробирку, оставляют на некоторое время в комнате для свертывания, а позже – отправляют в обследование в специальную лабораторию, которая имеется в кожно-венерологических отделениях.

Основа реакции РИФ – это непрямо метод определения флюоресцирующих антител. Антигеном для связывания в данном случае служит взвесь обработанных ультразвуковым излучением бледных трепонем. Таким образом, вещество фиксируют на предметных стеклах, куда также выставляют вещество крови пациента вместе с антивидовой флюоресцирующей сывороткой. Для определения результата потребуется люминесцентный микроскоп, с помощью которого специалист оценит степень свечения трепонем. Считается, что при положительном результате трепонемы имеют желто-зеленый оттенок свечения, и «мощность» этого процесса оценивается плюсами (от одного до четырех). Отрицательный результат – трепонемы не светятся.

Реакция РИБТ

Другая реакция, которая помогает диагностировать сифилис – это РИБТ, которая была впервые применена в 1949 году Нельсоном и Мейером. Её основа – феномен обездвиженных, бледных трепонем антигеном из сыворотки крови больного, в которой присутствует комплемент.

В качестве антигена для реакции применяется живые, бледные трепонемы, которые получены из крови зараженных сифилисом кроликов. Подсчет утративших подвижность трепонем проводиться под микроскопом. Результат реакции оценивается в процентах, где:

• Отрицательный – 0-20%
• Сомнительный – 21-31%
• Слабоположительный – 31-50%
• Положительный – 51-100%.

Реакция может показать положительный результат в конце первичной стадии сифилиса, и в большинстве случаев итог не меняется на протяжении всех этапов болезни. Иногда РИБТ положительна даже при полном выздоровлении. При третичном сифилисе, поражениях внутренних органов, врожденном сифилисе, когда КСР неточно показывает результаты, эта реакция дает истинные результаты в 98-100% случаев. К слову, чтобы диагностировать латентную, скрытую форму сифилиса обязательно требуется диагностика на РИБТ.

РИБТ может показать ложноположительный результат, если в исследованной крови есть элементы трепонемоционных веществ – антибиотиков, которые приводят к неспецифическому обездвиживанию живых бледных трепонем. Поэтому, брать кровь у пациента, которому предписали приём антибиотиков советуют не раньше, чем через две недели после окончания антибактериальной терапии.

Анализ спинномозговой жидкости

Часто, серологическое обследование применяют и для того, чтобы точно узнать степень поражения нервной системы сифилисом. Для этого применяют анализ на основе спинномозговой жидкости пациента. Также это исследование поможет определить белок, ферментные элементы, что свидетельствует о развитии патологии, и «облегчит» врачу уточнение диагноза. Как вы уже догадались, забор спинномозговой жидкости проводят не из пальца, а при помощи люмбальной пункции. Эта процедура требует от врача осторожности, следования всем нормативам и технике безопасности, чтобы не усугубить положение больного. Как правило, такое обследование назначается в случае подозрения любой формы сифилиса центральной нервной системы.

Методы обнаружения бледной трепонемы. Наилучшим способом обнаружения бледных трепонем является метод исследования в темном поле микроскопа, что позволяет наблюдать трепонему в живом состоянии со всеми особенностями ее строения и движения.

Материал для исследования берут в основном с поверхности твердого шанкра и эрозивных папул. Предварительно их необходимо очистить с помощью примочек из изотонического раствора натрия хлорида от различных загрязнений и применявшихся ранее наружных лекарственных средств.

Перед взятием материала поверхность твердого шанкра (или другого сифилида) просушивают марлей, затем инфильтрат захватывают двумя пальцами левой руки (в резиновой перчатке) и слегка сдавливают с боков, а эрозия осторожно поглаживается платиновой петлей или ватно-марлевым тампоном до появления тканевой жидкости (без крови). Каплю полученной жидкости переносят петлей на тонкое, предварительно обезжиренное смесью спирта с эфиром предметное стекло, смешивают с таким же количеством изотонического раствора натрия хлорида и покрывают тонким покровным стеклом.

Приготовленный препарат с живыми трепонемами микроскопируют в темном поле. Для его получения необходимо конденсор в микроскопе заменить на специальный, так называемый параболоид-конденсор, и на его верхнюю линзу (под предметное стекло) нанести каплю кедрового масла или дистиллированной воды. При отсутствии параболоид-конденсора можно использовать обычный конденсор, если на верхнюю поверхность его нижней линзы прикрепить кружок плотной черной бумаги с таким расчетом, чтобы по краю линзы оставался просвет в 2-3 мм. Для предупреждения смещения кружка следует при его вырезании оставить 4 выступа, которые упирались бы в металлическую оправу линзы.

Микроскопирование в темном поле зрения . Бледная трепонема выглядит очень нежной и подвижной, слабо светящейся серебристым блеском спирально или пунктиром из-за более яркого освещения выпуклой части завитков. Она обладает активными движениями четырех видов :

1. сгибательное, при котором она раскачивается наподобие маятника;
2. ротаторное вокруг продольной оси;
3. поступательное, при котором чередуется то быстрое, то медленное движение вперед;
4. контрактильное - волнообразное движение всего тела трепонемы.

При отрицательных результатах исследования на подозрительную эрозию рекомендуется наложить на 24 или 48 ч часто меняемую повязку с изотоническим раствором натрия хлорида для очищения язвы или эрозии от вторичной флоры, после чего исследование проводят повторно. При многократных повторных отрицательных результатах исследуют пунктат из увеличенных лимфатических узлов.

Серологическая диагностика сифилиса. Серологические реакции являются важнейшим вспомогательным методом для распознавания сифилиса. С их помощью устанавливается эффективность лечения, прогнозируется течение заболевания, решаются вопросы о завершении лечения и наблюдения за больными.

Степень выраженности серологических реакций обозначается крестами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ или 1+ и отрицательная -. Кроме качественной оценки, используется и количественная постановка реакций с различными разведениями сыворотки (от 1:10 до 1:320 и выше).

Видео о сифилисе:

В настоящее время в состав комплекса серологических реакций (КСР) для диагностики сифилиса входят:

1. реакция связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами;
2. микрореакция преципитации (МРП);
3. реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ, пробирочная и меланжерная);
4. реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в модификациях: РИФ с абсорбцией - РИФ-абс.; с сывороткой крови и капиллярной кровью; РИФ-200; РИФ с цельной спинномозговой жидкостью - РИФ-ц. (качественные постановки).

МРП проводится как в серологических лабораториях (так как входит в комплекс КСР), так и отдельно в клинико-диагностических лабораториях для более широкого охвата населения. МРП обследуются лица, подлежащие периодическим медицинским осмотрам на венерические заболевания. МРП является отборочным, а не диагностическим тестом; если она положительна, то диагноз сифилиса не устанавливается, а обследуемого направляют к дерматовенерологу, который должен подвергнуть его клиническому обследованию и организовать исследование крови на КСР.

КСР применяется для диагностики всех форм сифилиса, контроля за эффективностью лечения, обследования лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом, лиц с клиническим и анамнестическим подозрением на сифилис, больных психиатрических и неврологических стационаров, доноров и беременных, включая лиц, направленных на искусственное прерывание беременности.

РСК на холоде применяется в случае получения отрицательного анализа при использовании термостатного метода для диагностики всех форм сифилиса.

РИТ целесообразно ставить в случаях положительных стандартных серологических реакций на сифилис у лиц без клинических и анамнестических признаков сифилиса. РИТ считается положительной при иммобилизации от 51 до 100% трепонем, слабоположительной - от 31 до 51%, сомнительной - от 21 до 30%, отрицательной - от 0 до 20%.

РИТ и РИФ необходимы для диагностики скрытых и поздних форм сифилиса; для распознавания ложноположительных результатов КСР и МР, особенно у беременных и соматических больных; при клиническом и эпидемиологическом подозрении на сифилис, а также для установления излеченности сифилиса.

РИФ-абс. рекомендуется применять при обследовании лиц, имевших половые контакты с больными сифилисом, так как она становится положительной раньше других реакций. РИФ-абс. целесообразна при формах сифилиса, сопровождающихся малой концентрацией в крови противотрепонемных антител.

Техника взятия крови для серологических реакций. Кровь для исследования на РСК, РИФ и РИТ берут из локтевой вены натощак шприцем или одной иглой (самотеком). Шприц и игла должны быть после стерилизации промыты изотоническим раствором натрия хлорида (нельзя промывать водой, спиртом, кислотами, щелочами). В чистую сухую пробирку забирают 5-7 мл крови.

Кровь для исследования экспресс-методом берут из пальца или из локтевой вены.

При необходимости для исследования в отдаленных лабораториях можно вместо крови пересылать сухие сыворотки. Для этого на следующий день после взятия крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают 1 мл сыворотки в шприц и выливают ее в виде двух отдельных кружков на полоску писчей бумаги, вощаной бумаги или целлофана размером 6

Сифилис сопровождается многочисленными симптомами и имеет большое количество клинических форм. Его распознавание основано на комплексном клинико-лабораторном обследовании пациента. Общий анализ крови при сифилисе несет мало информации, поэтому для диагностики болезни не применяется.

Для анализов могут браться следующие материалы:

• кровь из пальца и вены;
• ликвор — спинно-мозговая жидкость;
• отделяемое твердого шанкра (язвы);
• участки регионарных лимфоузлов.

Выбор материала и метода диагностики зависит от стадии болезни. О том, какие анализы сдают на сифилис, мы поговорим в следующей рубрике.

Классификация методов лабораторной диагностики болезни

В начальной стадии можно использовать бактериоскопический метод, основанный на определении возбудителя – бледной трепонемы – под микроскопом. В дальнейшем широко используются серологические тесты, основанные на определении микробных антигенов и вырабатываемых организмом антител в биологическом материале.

Бактериологические исследование не проводят, так как возбудитель сифилиса очень плохо растет на питательных средах в искусственных условиях.

Все методы обнаружения трепонемы, то есть виды анализов на сифилис, делятся на две большие группы:

1. Прямые, которые непосредственно обнаруживают сам микроб:

• темнопольная микроскопия (выявление трепонем на темном фоне);
• RIT-тест – заражение исследуемым материалом кроликов;
• полимеразная цепная реакция (ПЦР), обнаруживающая участки генетического материала микроорганизма.

2. Непрямые (серологические), основанные на выявлении антител к микробу, которые вырабатываются организмом в ответ на инфицирование.

Серологические анализы делятся на две группы

Нетрепонемные:

• реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк);
• реакция микропреципитации (РМП);
• тест быстрых плазменных реагинов (RPR);
• проба с толуидиновым красным.

Трепонемные:

• реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСКт);
• реакция иммобилизации трепонем (РИТ или РИБТ);
• реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
• реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);
• иммуноферментный анализ (ИФА);
• иммуноблоттинг.

Методики этих анализов достаточно сложны, поэтому мы остановимся в основном на том, когда они проводятся и насколько точную информацию дают.

Сразу скажем, что основа диагностики сифилиса – серологические методы. Как называется анализ на сифилис: в каждом случае обследование может включать разные методики. Ниже мы более подробно расскажем о них.

Прямые тесты

Убедительно доказывает наличие трепонем их обнаружение под микроскопом. Вероятность сифилиса при этом достигает 97%. Вместе с тем микробы можно обнаружить лишь у 8 больных из 10, поэтому отрицательный тест не исключает заболевание.

Диагностика проводится в и периодах, когда имеются твердый шанкр или кожная сыпь. В отделяемом этих заразных элементов и ищут возбудителей болезни.

Более эффективный, но вместе с тем более дорогой и сложный анализ – обнаружение трепонем после предварительной обработки их флуоресцентными антителами. Это вещества, «прилипающие» к микробам и образующие «свечение» их в поле микроскопа.

Чувствительность методов снижается при большой длительности болезни, обработке язв и сыпи антисептиками, а также после лечения.

Биологический метод диагностики RIT высокоспецифичен, но дорог, а результат получается лишь через долгое время, когда у зараженного животного разовьется заболевание. В настоящее время метод практически не используют, хотя он практически самый точный из всех. Отличный анализ крови на сифилис для обнаружения генетического материала трепонем – ПЦР. Единственное его ограничение – относительная дороговизна диагностики.

Серологические методы

Нетрепонемные тесты

РСКк и РМП

Самый известный из этих анализов – реакция Вассермана. Это способ быстрой диагностики (экспресс анализ на сифилис), основанный на сходной реакции антител из крови больного человека на сами трепонемы и на кардиолипин, полученный из бычьего сердца. В результате такого взаимодействия антител и кардиолипина образуются хлопья.

В России данный анализ практически не используется. Его заменила реакция микропреципитации. Недостатком метода является его низкая специфичность. Ложноположительный анализ крови на сифилис встречается при туберкулезе, болезнях крови, системной красной волчанке, при беременности, после рождения ребенка, во время менструального кровотечения и во многих других случаях. Поэтому при положительной RW применяют более точные методы диагностики.

После заражения реакция становится положительной через два месяца. При вторичном сифилисе она положительна практически у всех больных.

Сходный механизм имеет реакция микропреципитации, заменившая реакцию Вассермана. Она недорога, легко исполнима, быстра в оценке, но тоже может давать ложноположительный результат. Эти два теста используют как скрининговые.

РМП становится положительной через месяц после появления твердого шанкра. Для ее проведения используется кровь из пальца.

Может ли анализ на сифилис быть ошибочным? Конечно, да, особенно при использовании нетрепонемных тестов.

Причины острых ложноположительных проб при использовании РМП:

• острые инфекционные заболевания;
• воспаление легких;
• инфаркт миокарда;
• инсульт;
• травмы и отравления.

Хронические ложноположительные результаты часто возникают при следующих болезнях:

• туберкулез;
• бруцеллез;
• лептоспироз;
• саркоидоз;
• ревматические болезни;
• инфекционный мононуклеоз;
• злокачественные опухоли;
• сахарный диабет;
• цирроз печени и другие.

Если возникают спорные анализы – применяют трепонемные серологические тесты для уточнения диагноза.

RPR и проба с толуидиновым красным

Тест быстрых плазменных реагинов (анализ на сифилис rpr) – еще одна разновидность реакции с кардиолипиновым антигеном. Ее используют в следующих случаях:

• скрининг населения;
• подозрение на сифилис;
• обследование доноров.

Упомянем еще и пробу с толуидиновым красным. Все эти способы используются для оценки эффективности лечения. Они являются полуколичественными, то есть уменьшаются при выздоровлении и возрастают при рецидиве инфекции.

Отрицательные результаты нетрепонемных тестов с большой вероятностью свидетельствуют, что сифилиса у обследуемого нет. Поэтому нетрепонемные тесты применяются для оценки излеченности. Первый такой анализ следует сдать через 3 месяца после завершения курса лечения.

Трепонемные тесты

Трепонемные тесты основаны на использовании трепонемных антигенов, что значительно повышает их диагностическую ценность. Они применяются в следующих ситуациях:

• положительный скрининг-тест (реакция микропреципитации);
• распознавание ложноположительного результата скрининга;
• подозрение на сифилис;
• диагностика скрытых форм;
• ретроспективная постановка диагноза, когда пациент перенес заболевание ранее.

РИТ и РИФ

Самые качественные (высокочувствительные и высокоспецифичные) – РИТ и РИФ. Недостатки этих методов – сложность, длительность, необходимость современного оборудования и обученного персонала. У большинства вылеченных пациентов трепонемные тесты остаются положительными в течение многих лет, и поэтому не могут применяться как критерий излеченности.

РИФ становится положительной через два месяца после заражения. Если она отрицательная – пациент здоров, если положительная – высока вероятность заболевания.

РИТ особенно часто применяется при положительных результатах РМП, чтобы исключить или подтвердить заболевание. Она высокочувствительна и позволяет с большой точностью сказать, есть у пациента сифилис, или нет. Однако анализ становится положительным только через три месяца после инфицирования.

Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг еще более чувствителен, чем РИФ, но менее чувствителен, чем РПГА. Его используют нечасто, в основном для диагностики сифилиса новорожденных.

Перечисленные методы не подходят для скрининга, то есть быстрого выявления болезни, потому что становятся положительными позднее, чем реакция микропреципитации.

ИФА и РПГА

Современные высокоинформативные стандартизированные методы диагностики сифилиса – ИФА и РПГА. Они недороги, быстро ставятся и проверяются в больших количествах. Эти тесты могут быть применены для подтверждения диагноза.

Анализ РПГА становится положительным при первичном серопозитивном сифилисе, то есть при появлении твердого шанкра (через месяц после заражения). Особенно он ценен при диагностике поздних, и врожденных форм заболевания. Однако РПГА должна быть дополнена как минимум одним нетрепонемным и одним трепонемным тестом для точности диагностики. Такой тройной тест – самый достоверный анализ на сифилис. Недостаток РПГА – сохранение положительной реакции в течение долгого времени, что не позволяет применять тест как критерий излеченности.

Анализ ИФА на сифилис становится положительным уже через три недели после заболевания. Минусом ИФА является то, что он бывает ложный. Ложноположительная реакция возникает при системных заболеваниях, нарушениях обмена веществ, а также у детей, рожденных больными матерями.

Недостатки серологических методов привели к разработке самых совершенных способов, не дающих ошибок, но пока дорогих и редко применяемых – газовой хроматографии и масс-спектрометрии.

Алгоритм диагностики сифилитической инфекции на разных стадиях

В первичном серонегативном периоде (до 2 месяцев после заражения) проводят поиск трепонемы в темном поле или с использованием флюоресцирующих антител.

При первичном серопозитивном, вторичном и скрытом сифилисе используют РМП и ИФА, а как подтверждающий тест – РПГА.

У пациентов с рецидивами вторичного сифилиса исследуют элементы сыпи, пытаясь выделить из них трепонемы для микроскопического изучения.

В третичном периоде РМП у трети больных отрицательная. ИФА и РПГА положительные, но они могут свидетельствовать не о третичном сифилисе, а о перенесенном ранее заболевании. Слабоположительный анализ скорее говорит о выздоровлении, чем о третичном сифилисе.

При выставлении диагноза «врожденный сифилис» принимают во внимание наличие болезни у матери, разницу в показателях РМП у матери и ребенка, положительные ИФА и РПГА у новорожденного, иммуноблоттинг.

Обязательно обследуются на сифилис беременные женщины, особенно те, у которых уже были роды мертвым плодом, неразвивающаяся беременность, ранние выкидыши. Им проводится РМП, ИФА, РПГА. Обследуют на наличие заболевания и перед прерыванием беременности.

Правила получения анализа на сифилис

Чтобы получить направление в лабораторию, нужно посетить своего участкового терапевта. Если хочется сдать анализ быстрее, это можно сделать в частной лаборатории без направления (например, лаборатории Инвитро анализ на сифилис делают быстро и анонимно).

Как сдать анализ на сифилис? Кровь сдается с утра, натощак. Можно пить лишь чистую воду.

Подготовка: за два дня до сдачи анализа нужно исключить из питания жирную пищу и особенно алкоголь.

Как берут анализ? обычным способом из пальца или локтевой вены.

Сколько делается анализ на сифилис? Результат пробы обычно бывает готов уже на следующий день. Расшифровка может быть взята у врача или в лаборатории.

Сколько действителен анализ? На срок до трех месяцев.

Анализ спинно-мозговой жидкости

В некоторых случаях для диагностики нейросифилиса берут анализ ликвора.

Это обследование назначается всем пациентам со скрытым сифилисом, если у них существуют признаки патологии нервной системы, а также при скрытом и позднем нейросифилисе.

Кроме того, анализ выполняется всем пациентам после выздоровления при сохранении у них положительных серологических реакций. Мы уже писали в нашей статье, что такое явление случается нередко.

Анализ ликвора при сифилисе назначает и проводит только врач.

Спинно-мозговую жидкость получают путем прокола между двумя позвонками поясничного отдела. Ее собирают по 4 мл в две пробирки. Затем место пункции обрабатывается йодом и накрывается стерильной повязкой. После пункции пациент должен лежать на животе с приподнятым ножным концом кровати не менее 3-4 часов, затем он может лечь на бок. Постельный режим после пункции показан в течение двух суток.

Ликвор из первой пробирки исследуют с помощью общепринятых реакций на содержание белка, клеток, определение признаков менингита (воспаления мозговых оболочек).

Спинно-мозговая жидкость из второй пробирки исследуется на содержание антител к трепонеме с помощью реакции Вассермана, РМП, РИФ и РИБТ, о которых мы говорили выше.

По степени выраженности нарушений различают четыре вида изменений ликвора. Анализируя их, врач может сделать вывод о наличии разных форм поражения нервной системы (сосудистый нейросифилис, сифилитический менингит, менинго-васкулярный сифилис, спинная сухотка, поздний мезенхимальный нейросифилис), а также о выздоровлении больного с положительными серологическими тестами.

Чтобы врачу поставить точный диагноз на сифилис, нужна дополнительная и точная информация, поэтому пациента направляют на обследование, состоящее из нескольких видов анализов .

Одним из самых распространенных способов обнаружения трепонем - это исследование в темном поле микроскопа. Благодаря такому методу, специалист может видеть «живой» микроорганизм в действии. Можно отслеживать и движения бледной трепонемы, а также видеть все особенности её строения. Чтобы начать такой анализ, необходимо добыть материал, который можно взять с поверхности шанкра или очагов эрозии.

Благодаря кср на сифилис, эффективность лечения значительно возрастает, есть возможность ставить прогнозы на дальнейший исход заболевания. С помощью реакции на сифилис устанавливается полная программа терапии и контроль над состоянием больного пациента. Уровень пораженности серологических реакций обозначают крестиком и различаются так:

• - отрицательная;
• 1+ - слабоположительная;
• 2+ - слабоположительная;
• 3+ - положительная;
• 4+ - резко положительная.

Кср на сифилис используется для диагностики всех форм этого венерического заболевания, в обследовании пациентов, имевшие незащищенный секс с инфицированным человеком, людям, подозревающихся на наличие бледных трепонем, а также беременным женщинам - для исключения наличия бледной трепонемы в организме.

В случае положительной Кср реакции на сифилис в результате проведённого анализа, для полной картины врач венеролог назначает ряд дополнительных анализов, и только после получения и рассмотрения результатов, ставит диагноз и определяет эффективную программу лечения. На сегодняшний день, медицина предоставляет возможность провести следующие дополнительные тесты:

• РВ (реакция Вассермана). Часто может давать ложноположительный результат.
• РИФ (реакция иммунофлюоресценции или метод Кунса). Имеется три метода: прямой, непрямой и с комплементом. Реакция Кунса помогает выявить антигены микробов или обнаружить наличие антител.

Благодаря проведению кср и дополнительных исследований, ошибки в диагностировании быть не должно. А значит, врач венеролог сможет расписать продуктивную программу лечения, прогнозировать течение заболевания и его излечимость. Ведь, чем раньше вы начнёте лечение, тем больше вероятности того, что эта болезнь не принесёт вам непоправимого вреда для всего организма. Сифилис - опасная и заразная болезнь, не лечение которой неминуемо приводит к смерти.

Серологическая диагностика сифилиса

Диагностика сифилиса основывается на клинических и лабораторных данных. Диагноз сифилиса ставят только после лабораторного подтверждения, т. е. обнаружения бледных трепонем в отделяемом твердого шанкра, эрозивных папул при первичном и вторичном сифилисе, и данных серологического обследования. Серологические реакции являются чрезвычайно ценным методом не только для подтверждения диагноза сифилиса, но и наблюдения за динамикой его течения под влиянием лечения и определения излеченности болезни.

Стандартные компоненты комплекса серологических реакций (КСР) для констатации сифилитической инфекции в настоящее время дополняются трепонемными реакциями: РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем), РИФ (реакция иммунофлюоресценции). Реакция Вассермана (RW, РВ) основана на феномене связывания комплемента. Для ее постановки используют кардиолипиновый антиген, являющийся холестеринизированным спиртовым экстрактом из мышц бычьего сердца и обладающий сходными антигенными свойствами с бледной трепонемой.

Реакция Вассермана. Комплемент связывается комплексом (липоидный антиген и реагин испытуемой сыворотки). Для индикации образовавшегося комплекса используют гемолитическую систему (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка).

В группу КСР кроме реакции связывания комплемента с кардиолипиновым и трепонемным антигенами, включена реакция на стекле (экспресс-метод). Выраженность гемолиза при РВ обозначается плюсами:

резко положительная - 4 +; положительная - 3 +; слабоположительная - 2 + или 1 +; отрицательная - -.

Имеет значение и постановка реакции по количественному методу, т. е. с различными разведениями сыворотки (1:10; 1:20 и т.д. до 1:320). Многочисленность стандартных серологических реакций объясняется антигенной мозаичностью бледных трепонем, в связи с чем в сыворотке крови больных возникает соответствующая множественность антител (комплементсвязывающие, агглютинины, преципитины, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию и др.). В каждой стадии сифилиса могут преобладать те или иные антитела и, следовательно, реакции с одними антигенами могут быть уже положительными, а с другими - еще отрицательными. Кроме того, относительная специфичность стандартных серологических реакций вызывает необходимость во избежание диагностических ошибок пользоваться не одной из них, а комплексом реакций. КСР становятся положительными в конце 3-й или в течение 4-й недели после появления твердого шанкра. Эти реакции бывают резко положительными и в значительном разведении сывороток практически у всех больных вторичным свежим (98-99%), вторичным рецидивным (100%), третичным активным (70-80%) и третичным скрытым (50-60%) сифилисом. Однако КСР не является строго специфичным комплексом реакций для сифилиса. Они могут оказаться положительными у больных лепрой, туберкулезом, бруцеллезом, малярией, красной волчанкой, а также при пневмонии, заболеваниях печени, онкологических болезнях, после приема алкоголя, жирной пищи, во время беременности, особенно во второй ее половине, а также в течение первых 2 нед. после родов. С возрастом количество неспецифических ложноположительных результатов КСР увеличивается.

Для обоснованного диагноза сифилиса наряду с данными КСР учитываются клинические данные, результаты исследования на бледную трепонему в манифестных проявлениях первичного и вторичного сифилиса, данные других серологических реакций - РИБТ и РИФ.

РИБТ основана на феномене обездвиживания бледных трепонем антителами типа иммобилизинов, имеющимися в сыворотке крови больных сифилисом. В качестве антигена для РИБТ используют взвесь бледных трепонем, полученных из тканей сифилитического орхита кролика. Бледные трепонемы после добавления к ним сыворотки крови больного прекращают движение, т. е. происходит их иммобилизация. Результаты реакции оценивают в процентах: положительная РИБТ констатируется при иммобилизации от 51 до 100% бледных трепонем, слабоположительная - от 31 до 50%, сомнительная - от 21 до 30% и отрицательная - от 0 до 20%. Реакцию ставят в условиях анаэробиоза. Иммобилизины появляются в сыворотке крови больных позднее, чем другие антитела, поэтому РИБТ становится положительной позже, чем КСР и РИФ. РИБТ является наиболее специфичной из существующих реакций на сифилис. Ее основное назначение - распознавание ложноположительных результатов при постановке КСР. Это особенно важно в отношении больных, у которых сифилис протекает скрыто без наружных проявлений, но с поражением внутренних органов или нервной системы. Особенное значение имеет РИБТ при распознавании ложноположительных результатов КСР у беременных. Следует помнить, что неспецифические положительные результаты РИБТ возможны и у больных саркоидозом, красной волчанкой, туберкулезом, циррозом печени и др. Однако при этих заболеваниях РИБТ бывает слабоположительной (от 30 до 50%) и никогда не достигает 100%). При лечении антибиотиками результаты РИБТ становятся негативными. Поэтому исследования с помощью РИБТ проводятся только через 7 дней, если вводились водорастворимые антибиотики, и через 25 дней после окончания лечения дюрантными антибиотиками.

РИФ - более чувствительная реакция, поэтому она бывает положительной уже в первичном серонегативном периоде сифилиса у 80% больных. По степени специфичности РИФ уступает РИБТ, что не позволяет заменить ею РИБТ, хотя техника ее значительно проще. Реакцию ставят в нескольких модификациях: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-абс. (абсорбированная). РИФ-10 более чувствительна, а РИФ-200 и РИФ-абс. более специфичны. Принцип реакции заключается в том, что специфический антиген (бледные трепонемы) соединяют с сывороткой крови больного (антитела) и антивидовой флюоресцирующей сывороткой (кроличья сыворотка против глобулинов человека, соединенная с флюоресцеином, - веществом, светящимся при ультрафиолетовом свете). При положительной реакции в люминесцентном микроскопе можно видеть желто-зеленое свечение бледных трепонем, поскольку они оказываются окруженными прилепляющимися к ним флюоресцирующими антителами. Степень свечения оценивается плюсами, как и при КСР. Положительная реакция констатируется 4 +, 3 + и 2. +. При степени свечения 1 + и отсутствии свечения реакция считается отрицательной. При вторичном сифилисе РИФ положительна почти в 100% случае. Она всегда положительна при латентном сифилисе (99-100%), а при третичных формах и врожденном сифилисе положительна в 95-100%.

Экспресс-метод (микрореакция на стекле). В этой реакции, так же как и при КСР, используют кардиолипиновый антиген, одну каплю которого смешивают с 2-3 каплями сыворотки крови обследуемого человека в лунках специальной стеклянной пластины. Реакция протекает по механизму преципитации. Общая продолжительность постановки реакции 10-40 мин. Результат оценивают по количеству выпавшего осадка и величине хлопьев; выраженность реакции обозначают плюсами: 4 +, 3 + и т.д., как и КСР. Микрореакция на стекле менее специфична лля больных сифилисом, чем РВ, но несколько превосходит ее по чувствительности. Ложноположительные результаты при экспресс-методе получают чаще, чем при РВ. Поэтому этот метод разрешен для применения только как отборочная реакция при массовых обследованиях населения, диспансеризации и обследовании больных в клинико-диагностических лабораториях соматических больниц. Окончательный диагноз сифилиса на основании этого метода устанавливать запрещено. Только экспресс-метод нельзя применять при обследовании доноров, беременных, а также для контроля после лечения больных сифилисом.

Для диагностики сифилиса можно использовать и другие методы: иммуноферментный анализ (ИФА) с реакцией микропреципитации (РПМ) или реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА) с РМП (в том числе зарубежных аналогов РМП - RPR или VDRL).

При проведении клинико-серологического контроля после специфического лечения (для определения эффективности терапии) допускается количественное исследование РМП (изучение титра реакции в динамике).

Иммуноферментный анализ (ИФА, Elisa). Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антигеном испытуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса антиген-антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Чувствительность и специфичность ИФА аналогичны РИФ.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Макромодификацию этой реакции именуют ТРНА, микромодификацию - МНА-ТР, автоматизированный вариант - АМНА-ТР.

IgM-серология. В последние десятилетия широко изучается динамика образования антител в организме больных сифилисом до, в процессе и после окончания лечения. Это вызвано тем, что у пациентов, полноценно леченных по поводу сифилиса, в течение длительного времени остаются положительные результаты специфических серологических реакций на сифилис, что усложняет решение вопроса об излеченно-сти больных, а также постановку диагноза раннего врожденного сифилиса. Затруднена также дифференциальная диагностика рецидива заболевания и реинфекции. При изучении антителообразовния в организме больных сифилисом было установлено, что первыми после заражения вырабатываются специфические IgM, выявляемые уже на второй неделе после заражения и достигающие максимальной концентрации в крови на 6-9 неделе. Через 6 мес. после окончания терапии у большинства больных в крови они не определяются. На четвертой неделе после инфицирования организм начинает продуцировать специфические IgG. Этот вид иммуноглобулинов в наибольшем количестве определяется через 1-2 года после заражения. Следует обратить внимание на то, что специфические IgM перестают вырабатываться при исчезновении из организма антигена, а секреции IgG продолжается клонами клеток памяти. Кроме того крупные молекулы IgM не проходят через плаценту от матери к плоду, в связи с чем по их наличию у ребенка судят об его инфицировании бледной трепонемой. Ввиду того, что концентрация в крови специфических IgM закономерно снижается с течением времени, рост титра этих антител может служить вспомогательным признаком наличия рецидива заболевания или реинфекции.