Принцип реакции ифа на вич. Особенности проведения иммуноферментного анализа (ИФА). Альтернативный способ ИФА

В связи с развитием клеточных технологий, молекулярной биологии, генетики, физики, химии и ряда других высокотехнологичных дисциплин в повседневную практику внедряются новые высокоточные и высокотехнологичные методы. Данные междисциплинарные тенденции затрагивают и область медицинских знаний, и смежные области биологических, биохимических проблем. За последние десять лет получил широкое распространение и внедрение в массовую практику метод клинической лабораторной диагностики под названием иммуноферментный анализ.

Вообще технологии иммунологических ферментативных и радиологических реакций широко использовались в типировании клеток, культур клеток, различных тканей с начала 80-х годов XX столетия. Однако методы эти были очень трудоемкими, не унифицированными, не стандартизированными, что исключало их использование в лечебно-диагностических целях в массовом порядке. Такими методами пользовались лишь узкие, наукоемкие и высокоспециализированные лаборатории.

Однако с развитием техники, микротехники, производства различных биополимерных материалов стало возможным производить готовые наборы иммуноферментной диагностики, которыми смогут пользоваться лаборатории лечебно-профилактических учреждений широкого профиля. ИФА широко используется для диагностики всевозможных инфекций (хламидиоз , сифилис , цитомегаловирус , токсоплазмоз , герпес и т.д.), как острых, так и хронических, а также скрытых форм, которые протекают без клинических симптомов.Также этот метод применяют для контроля над хроническими заболеваниями. Давайте постараемся разобраться, что это за метод, и какие принципы лежат в его основе?

Компоненты иммуноферментного анализа – иммунная реакция и ферментативная реакция

Иммунная реакция, что это? Что такое антитело, антиген?

Что такое иммунная реакция? Что такое антиген?

Индивидуальные и видовые антигены – что это? Зачем нужны эти антигены?

Имеются антигены индивидуальные , то есть присущие только данному конкретному организму. Эти индивидуальные антигены разные у всех людей, есть похожие друг на друга, но все равно отличающиеся. Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе не существует!

Второй основной тип антигенов – это видовые антигены , то есть присущие какому-либо конкретному виду живых существ. Например, у человека присутствует свой видовой антиген, общий для всех людей, у мышей имеется свой мышиный видовой антиген и т.д. На поверхности каждой клетки обязательно присутствуют видовой и индивидуальный антиген.

Видовой антиген используют клетки иммунной системы для опознавания «свой – чужой».

Как происходит узнавание антигена?

Иммунная клетка связывается с подозрительной клеткой и проводит опознание именно по индивидуальному антигену. В памяти иммунной клетки «записано» как выглядит «свой антиген». Таким образом, если антиген подозрительной клетки совпадает с описанием «свой антиген», значит, эта клетка собственного организма и опасности не представляет. Тогда иммунная клетка «отвязывается» и уходит. А если антиген не совпадает с описанием «свой», тогда иммунная клетка идентифицирует эту клетку как «чужой», а значит потенциально опасный для всего организма. В этом случае иммунная клетка не «отвязывается», а начинает уничтожать опасный объект. Точность такого иммунологического узнавания поражает воображение – 99,97%. Ошибок практически не бывает!

Что такое антитело, иммунный комплекс?
А что представляет собой антитело?

Антитело – это особая молекула, расположенная на поверхности иммунной клетки. Именно антитело и связывается с антигенами подозрительной клетки. Далее антитело передает информацию внутрь клетки, где происходит опознавание, и получает обратный сигнал двух видов «свой» или «чужой». При сигнале «свой» антитело разрушает связь с антигеном и отпускает клетку.

Что такое иммунный комплекс?
При сигнале «чужой» ситуация разворачивается иначе. Антитело не разрывает связь с антигеном, а наоборот, посылая специфические сигналы, вызывает «подкрепление». Биологически это означает, что другие антитела, находящиеся в другой части клетки, начинают перемещаться к участку, откуда идет сигнал опасности, и также образуют связь между собой и пойманным антигеном. В конце концов, антиген оказывается, окружен со всех сторон и прочно привязан.Такой комплекс антиген + антитело называется иммунный комплекс . С этого момента начинается утилизация антигена. Но сейчас подробности процесса нейтрализации антигена нас не интересуют.

Виды антител (IgA , IgM , IgG , IgD , IgE )
Антитела – это белковые структуры, которые, соответственно, имеют химическое название, которое и используется как синоним слова антитела. Итак, антитела = иммуноглобулины .

Существуют 5 типов иммуноглобулинов (Ig) , которые связываются с разными видами антигенов в разных местах человеческого организма (например, на коже, на слизистых, в крови и т. д.). То есть антитела имеют разделение труда. Эти иммуноглобулины называются буквами латинского алфавита – A, M, G, D, E и обозначаются следующим образом – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

В диагностике используют только один вид антител, который наиболее специфичен в отношении определяемого микроба. То есть связывание данного вида антител с определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего применяются IgG и IgM.

Именно этот принцип иммунной реакции (уникальная точность и специфичность узнавания определяемого биологического объекта) лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.

Ферментативная реакция

Что такое ферментативная реакция?

Ферментативная реакция – это химическая реакция, при которой одно вещество под действием фермента превращается в другое. Вещество, на которое действует фермент,называется субстратом . А вещество, которое получается в результате воздействия фермента, называется продуктом реакции . Причем особенность ферментативной реакции такова, что определенный фермент действует только на определенный субстрат. Такое свойство фермента узнавать «свой» субстрат называется сродством .

Таким образом, каждый фермент проводит только одну, специфичную для него реакцию. Ферментов в биологическом мире известно великое множество, равно как и ферментативных реакций. В иммуноферментной диагностике используется лишь несколько ферментативных реакций – не более 10.При этом выбирали такие ферментативные реакции, продуктом которых являются окрашенные вещества. Почему же продукты ферментативной реакции должны быть окрашенными? Потому что для вычисления концентрации вещества по окрашенному раствору существует простой химический метод – колориметрия .

Метод колориметрии – суть и принцип

Колориметрия

Далее измеряют плотность окраски раствора, концентрацию которого выясняют, и по калибровочному графику находят значение концентрации, соответствующее уровню измеренной плотности окраски раствора.В современных автоматических колориметрах только один раз проводят калибровку, далее аппарат сам строит калибровочную кривую, которая остается в памяти прибора, и измерение происходит автоматически.

В иммуноферментном анализе чаще всего применяются следующие ферменты: пероксидаза, щелочная фосфатаза , авидин.

Как же совмещаются иммунологическая и ферментативная реакция в иммуноферментном анализе? Сейчас мы перейдем к рассмотрению собственно иммуноферментного анализа. Какие этапы он включает и что происходит при протекании этих реакций? Иммуноферментный анализ бывает прямой и непрямой .

Прямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

Прикрепление антигенов к поверхности лунки и соединение антигена с антителом

Как проходит прямой иммуноферментный анализ? Берется биологический материал (кровь, соскобы со слизистых, мазки) и помещается в специальные лунки. Биологический материал оставляют в лунках на 15-30 минут, чтобы антигены могли приклеиться к поверхности лунок. Далее в эти лунки добавляют антитела к выявляемому антигену. Это значит, что выявляя антигены, например, сифилиса, добавляются антитела против антигенов сифилиса. Эти антитела получают промышленным способом, а лаборатории покупают уже готовые наборы.Данную смесь исследуемого материала и антител оставляют на некоторое время (от 30 минут до 4-5 часов), чтобы антитела смогли найти и связаться со «своим» антигеном.Чем больше в биологической пробе антигенов, тем больше антител свяжется с ними.

Удаление «лишних» антител

Как было указано, антитела к тому же связаны со специфической меткой.Поскольку антитела добавляются в избытке, то не все они свяжутся с антигенами, а если антигена вообще нет в пробе, то, соответственно, ни одно антитело не свяжется с искомым антигеном. Для того чтобы убрать «лишние» антитела, содержимое из лунок просто выливают. В результате этого все «лишние» антитела убираются, а остаются те, которые связались с антигенами, поскольку антигены «приклеены» к поверхности лунок. Лунки несколько раз ополаскивают специальным раствором, который позволяет вымыть все «лишние» антитела.

Далее начинается второй этап – ферментативная реакция. В промытые лунки добавляют раствор с ферментом и оставляют на 30-60 минут. Данный фермент имеет сродство к веществу (специфической метке), с которым связаны антитела. Фермент проводит реакцию, в результате которой эта специфическая метка (субстрат) превращается в окрашенное вещество (продукт). Затем методом колориметрии находят концентрацию этого окрашенного вещества. Поскольку данная специфическая метка связана с антителами, значит, концентрация окрашенного продукта реакции равна концентрации антител. А концентрация антител равна концентрации антигенов. Таким образом, в результате проведенного анализа мы получаем ответ, какова концентрация выявляемого микроба или гормона.

Именно так проходит прямой иммуноферментный анализ. Однако сегодня чаще используют непрямой иммуноферментный анализ, поскольку чувствительность и точность непрямого выше, чем прямого. Итак, перейдем к непрямому иммуноферментному анализу.

Непрямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

Фиксация антигенов на поверхности лунки и связывание антигена с немеченым антителом
Так же как и для прямого иммуноферментного анализа производится забор биологического материала – кровь, соскобы, мазки. Исследуемый биологический материал вносят в лунки и оставляют на 15-30 минут для приклеивания антигенов к поверхности лунок. Затем в лунки вносят немеченые антитела к антигенам и оставляют на промежуток времени (1-5 часов), чтобы антитела связались со «своими» антигенами и образовали иммунный комплекс (первый этап ). После чего удаляют «лишние», не связавшиеся антитела, путем выливания содержимого лунок. Производят промывку специальным раствором для полного удаления всех не связавшихся антител.

Связывание меченого антитела с комплексом антиген + немеченое антитело
После чего берут вторые антитела – меченые, добавляют в лунки и опять оставляют на некоторое время – 15-30 минут (второй этап ). За это время меченые антитела связываются с первыми – не мечеными и образуют комплекс – антитело + антитело + антиген. Однако и меченые, и не меченые антитела вносятся в лунки в избытке. Поэтому нужно опять удалить «лишние», уже меченые антитела, которые не связались с немечеными антителами. Для этого повторяют процедуру выливания содержимого лунок и промывки специальным раствором.

Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения
После чего вносят фермент, осуществляющий реакцию превращения «метки» в окрашенное вещество. Окраска развивается в течение 5-30 минут. Затем проводят колориметрию и вычисляют концентрацию окрашенного вещества. Поскольку концентрация окрашенного вещества равна концентрации меченых антител, а концентрация меченых равна концентрации немеченых антител, которая, в свою очередь равна концентрации антигена. Таким образом, получаем концентрацию выявляемого антигена.
Такой двойной контроль в виде использования двух видов антител позволил повысить чувствительность и специфичность метода иммуноферментного анализа. Несмотря на удлинение времени проведения анализа и включение дополнительных этапов, эти потери компенсируются точностью результата. Именно поэтому в настоящее время подавляющее большинство методик иммуноферментного анализа – это непрямой иммуноферментный анализ.

Какие заболевания выявляют методом иммуноферментной диагностики?

Иммуноферментный анализ крови – метод диагностики, который практикуется для выявления гельминтов у детей и взрослых.

Показание к проведению

Врачи назначают выполнение ИФА на инвазию в следующих случаях:

• число лейкоцитов у пациента существенно превышает норму при отсутствии симптоматики других патологий;
• беспокоят частые головокружения или головные боли без очевидных причин;
• возникают аллергические реакции;
• одолевают мышечные боли, упадок сил;
• долго не излечивается кашель;
• временами появляется лихорадочное состояние;
• у домашних животных выявляется наличие глистов;
• в регионе проживания ухудшается эпидемиологическая ситуация;
• профессия пациента связана с высоким риском заражения глистами (проводится плановая диагностика).

• расстройства пищеварения с изменением стула и его периодичности;
• боли в животе;
• колики в области печени;
• тошнота, переходящая в рвоту;
• признаки поражения центральной нервной системы: бессонница, повышенная нервозность, резкие перепады настроения.

Виды ИФА

Ферментативная реакция позволяет изучать установленные лаборантами виды гельминтов с визуальным измерением данных о них.

В лабораториях практикуются различные виды ИФА:

Как сдавать

Чтобы результаты исследования оказались максимально достоверными, следует неукоснительно выполнять все требования лаборатории. Необходимо:

• за 3 суток до сдачи крови прекратить прием всех медикаментов, кроме жизненно необходимых;
• за 2 суток приостановить физиотерапевтические процедуры;
• за 1 сутки отказаться от алкоголя и кофе;
• накануне не подвергаться физическим нагрузкам и эмоциональным стрессам;
• поужинать не позднее 19-20 часов (утром можно выпить немного воды).

Расшифровка

Вариант №1. IgM-, IgA+, IgG-: первичное заболевание (2 недели с момента инфицирования).

Вариант №2. IgM+, IgA+, IgG-: первичная болезнь (2,5-3 недели со времени заражения).

Вариант №3. IgM+, IgA+, IgG+: первичная инфекция (3-4 недели с момента заражения).

Вариант №4. IgM-, IgA+, IgG+: обострение хронической болезни (2 недели от начала обострения).

Вариант №5. IgM-, IgA+/-, IgG+: хроническая фаза.

Вариант №6. IgM-, IgA-, IgG+: вылеченная (прошедшая) инфекция, наличие иммунитета.

Вариант №7. IgM-, IgA, IgG не определяются (или снижение титра в 2-4 раза по окончании лечения, в 5-8 раз через 1-1,5 месяца после лечения): выздоровление.

Вариант №8. IgM-, IgA-, IgG-: отсутствие иммунитета к инфекции.

Преимущества и недостатки

Крайне редко тест выдает ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Причинами этого недостатка могут оказаться технические ошибки. Такие результаты возможны при ревматоидном факторе, при нарушениях обмена веществ и других хронических заболеваниях, вследствие которых вырабатываются защитные антитела, а также при приеме некоторых препаратов, например инсулина.

Методом ИФА определяются:

• ленточные черви (свиные цепни);
• круглые черви (аскариды, острицы, токсокары, стронгилоидиты);
• плоские черви (цестоды, сосальщики, нематоды);
• трихинеллы;
• к аскаридам – 935 руб.;
• к токсоплазмам – 715-1000 руб.

Развитие современной медицины в мире диагностики не перестает удивлять своими достижениями, и теперь врачу нет необходимости высказывать предположения о вероятном диагнозе, опираясь лишь на косвенные признаки. Создание и введение в мир лабораторных исследований иммуноферментного анализа крови (ИФА) позволяет быстро и точно определить не только наличие возбудителя, но и многие другие характеристики заболевания.

История создания и развития ИФА

Данный метод исследования крови стал применяться в практической медицине еще в середине прошлого столетия – где-то в 60-х годах. Изначальной его целью были научные исследования в области гистологии, которые ограничивались поиском и изучением клеточной антигенной структуры биологических видов. Анализ крови методом ИФА основан на взаимодействии родственных антигенов (АГ) и специфических антител (АТ), с формированием комплекса «антиген-антитело», определяемого ферментом.

Такой феномен подтолкнул ученых к решению, что способ можно применять для распознавания белковых соединений различных классов, образующихся в сыворотке крови при попадании в организм возбудителя. Из-за своей непосредственной вовлеченности в функционирование иммунной системы эти соединения получили название иммуноглобулины (ИГ, Ig), а открытие стало величайшим прорывом в лабораторной диагностике.

При этом активно использовать этот высокочувствительный метод стали лишь в 80-х годах, и доступен он был только в узкоспециализированных медицинских учреждениях. Самыми первыми получили возможность пользоваться иммуноферментными анализаторами станции и центры переливания крови, венерологические и инфекционные лечебные заведения. Это было связано со стремительным распространением «чумы XX века» – СПИДа, и требовалось срочное принятие диагностических и терапевтических мер.

Возможности методики

Область применения анализа крови на ИФА довольно широка – на данный момент невозможно и представить, насколько бы усложнились поиски причины множества заболеваний. Такое исследование теперь применяется практически во всех медицинских отраслях, даже в онкологии. Хоть для неосведомленных это сложно понять, но в отдельных случаях проведя его, удалось спасти жизнь пациентам, обнаружив опухоль на ранних стадиях.

Важно! ИФА – анализ крови, который показывает маркеры, характерные для некоторых злокачественных процессов, что позволяет обнаружить заболевание на том временном этапе, когда никакому другому способу это неподвластно.

В современных диагностических центрах, лабораторные обследования представлены не только онкомаркерами – они снабжены внушительным арсеналом панелей для проведения данной диагностики. С их помощью можно определить множество патологических состояний, таких как гормональные отклонения и инфекционные процессы различного происхождения.

Кроме этого, проведение и расшифровка анализа крови ИФА даст возможность отследить действие медицинских препаратов на организм больного человека и даже животного. Последнее широко применяется в ветеринарных клиниках, помогая сохранить здоровье нашим домашним питомцам либо кормильцам, обеспечивающим стабильное поступление мясной, молочной продукции и незаменимых в рационе яиц.

Так, в результате забора всего нескольких миллилитров венозной крови и ее диагностики методикой ИФА, врач, описав материалы исследования, сможет определить:

• гормональное состояние, включающее биологически активные вещества половых и щитовидной желез, а также надпочечников;
• наличие бактериальной и вирусной инфекции (гепатит В и С, сифилис, герпес, хламидиоз, туберкулез, мико- и уреаплазмоз, ВИЧ, TORCH) и другие заболевания данной природы;
• признаки жизнедеятельности возбудителей патологического процесса, завершившегося выздоровлением и перешедшего в стадию образования антител (иммунного ответа).

Такие комплексы гораздо проще распознаются и ликвидируются клетками иммунитета. Остаточные явления в виде антител во множественных случаях содержатся в крови пожизненно, что практически сводит риски повторного заражения к нулю.

Разновидности иммуноглобулинов

Существует несколько видов антител, причем каждый из них вовлекается в процесс иммунного ответа на определенном этапе. К примеру, первыми в ответ на попадание АГ в организм образовываются иммуноглобулины класса М (IgM). Самые высокие их показатели наблюдаются в первые дни заболевания.

Виды используемых при ИФА иммуноглобулинов

Затем иммунная система запускает в плазму ИГ класса G (IgG), ответственные за полное уничтожение антигенов и выздоровление больного. Позже они так и продолжают находиться в крови, тем самым подготавливая иммунитет к повторному попаданию идентичного возбудителя. По такому принципу работает вакцинация. При введении ослабленных антигенов патологических микроорганизмов, в плазме появляется и остается циркулировать много иммуноглобулинов.

Основными интересующими объектами для лабораторной диагностики считаются Ig классов M, G и A. По уровню их концентрации можно определить стадию заболевания и узнать, какими инфекционными болезнями человек болел в своей жизни. Например, можно проверить была ли в анамнезе ветряная оспа или краснуха. Врачу, чтобы узнать присутствует ли определенный вид АТ или АГ в организме пациента или концентрацию какого-либо гормона, нет необходимости назначать множественные лабораторные обследования – достаточно выписать направление на ИФА.

Суть методики

Методика исследования строится на нескольких вариантах (прямой и непрямой – конкурентный и неконкурентный) выполнения поставленных задач, причем каждый из них предназначен для определенных целей. Такой подход позволяет производить целенаправленный поиск, и в кратчайшие сроки выявлять причину той или иной патологии. Для обнаружения Ig разных классовых категорий применяется 96-луночный планшет (полистироловая панель), а в его лунках расположены сорбированные рекомбинантные белки. Они исполняют роль антигенов, и на начальном этапе находятся в твердой фазе.

При попадании в лунку с плазмой крови, антигены или антитела идентифицируют в связи со своей направленностью объект, и формируют комплекс (АГ – АТ). Данное образование закрепляется ферментным соединением (коньюгатом), который впоследствии проявится измененным окрашиванием лунки. ИФА производится на специфических тест-системах, изготовленных в профильных лабораториях и укомплектованных полным набором реагентов.

Данный анализ можно выполнять на вошерах – промывных аппаратах и считывающих спектрофометров, но они требуют ручного труда. Безусловно, лаборанту в несколько раз удобнее и быстрее осуществлять все манипуляции на полностью автоматизированных приборах. При их использовании сотрудники лаборатории освобождаются от большого объема монотонной деятельности – промывания, закапывания и остальной рутины, но не все лечебные учреждения могут себе позволить такую дорогостоящую аппаратуру

Поэтому многие больницы и диагностические заведения продолжают осуществлять ИФА по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация материалов исследования исключительно компетенция специалиста лабораторной диагностики – только ему могут рассказать результаты о специфике и тонкостях протекания заболевания. При этом врач должен обязательно учесть возможность получения ложноотрицательных или ложноположительных ответов.

Расшифровка материалов

Итогом качественной иммуноферментной диагностики должно стать однозначное заключение – найден искомый микроорганизм или нет в данном образце крови. Количественный анализ будет указывать на уровень концентрации и может выражаться двумя способами – значением в цифрах либо количеством знаков «+».

Анализируемые показатели

В процессе исследования производится тщательное изучение основных иммуноглобулинов, вовлеченных в иммунный ответ, таких как:

• IgM – обнаружение данного класса означает развитие острой формы инфекционного заболевания. Отрицательный результат по поиску IgM может быть как свидетельством отсутствия искомого возбудителя, так и перехода болезни в хроническое течение.
• IgА – определение этого класса при отсутствии IgM в большинстве случаев сигнал о хронической либо скрытой форме развития инфекционной болезни.
• IgM и IgА (одновременное наличие) – положительные результаты на оба вида свидетельствует о самом пике острой формы патологии.
• IgG – его наличие указывает на трансформацию заболевания в хроническую форму либо на выздоровление и формирование иммунитета к определяемому агенту.

Появление и накопление определенного класса ИГ происходит на разных временных этапах. Так, к примеру, первыми появляются IgM, приблизительно на 5 день от попадания возбудителя. ИГ находятся в крови около 5–6 недель, и затем постепенно пропадают. В это время они доступны к определению посредством ИФА. Ориентировочно через 3–4 недели от начала болезни появляются IgG, которые впоследствии могут оставаться на протяжении нескольких месяцев. Но в анализе их не всегда удается обнаружить.

IgА образуются в крови в период 2–4 недели, при этом 20% их содержится в сыворотке, а 80% – в секрете слизистых оболочек. Как правило, эти иммуноглобулины пропадают на протяжении 2–9 недель, что свидетельствует об уничтожении возбудителя и выздоровлении больного. Если же ИФА все же показывает наличие IgА, то это сигнализирует о переходе процесса в хроническую форму.

Варианты результатов анализа

В зависимости от полученных данных, ответы ИФА могут быть выданы на бланке в виде таблицы с полным списком всех АТ и АГ и указанием положительной либо отрицательной реакции. В определенных ситуациях будет выведено количественное значение – резко положительный, положительный, слабоположительный или отрицательный результат. Второй вариант указывает на количество содержащихся АТ в изучаемом образце крови.

Варианты интерпретации материалов ИФА

Кроме вышеперечисленных значений, в процессе ИФА исследуется еще один количественный параметр – индекс авидности АТ, исчисляющийся в процентах. Он показывает, сколько длится заболевание – то есть чем выше показатель, тем больше времени идет развитие патологии.

Альтернативный способ ИФА

Иммуноферментный анализ крови – достаточно известная и распространенная диагностика. Возможно, о ней никогда и не слышали некоторые, но существует одна еще менее известная широкому кругу людей разновидность данного исследования, при котором берется образец не крови. Эта методика называется анализ кала на скрытую кровь, и во многих случаях она позволяет избежать дополнительных изнуряющих процедур, к тому же еще сопровождающихся неприятными ощущениями.

Анализ ИФА на скрытую кровь (молекулы гемоглобина) дает возможность обнаружить кровотечение органов пищеварительной системы, даже незначительное, признаки которого в стуле больного, как говорится, невооруженным глазом не найти. Иммуноферментный анализ скрытой крови в испражнениях человека за короткое время способен показать язвенную болезнь, полипоз, дивертикулез, опухоли, которые на ранних стадиях не сопровождаются определенной симптоматикой.

На сегодняшний день созданы тысячи разновидностей тест-систем иммуноферментной диагностики, которые предоставляют возможность находить АТ и АГ огромного списка патологий. Поэтому данный анализ применяется почти во всех отраслях медицины, для любой возрастной категории. А абсолютная безвредность позволяет прибегать к нему и при беременности, и для диагностики ослабленных пациентов.

Иммуноферментный анализ крови является распространенным методом выявления различных патологий. Результат анализа крови, расшифровка ИФА которого была интерпретирована врачом лабораторной диагностики, является достоверным в большинстве случаев.

Что такое ИФА

ИФА - современный диагностический метод, который применяется для диагностики инфекций, гормональных и иммунных нарушений, онкологических заболеваний в лабораторных условиях. Метод позволяет выявить антитела к инфекции уже на ранних сроках заболевания. Данный метод относится к непрямым диагностическим методам, так как он выявляет иммунный ответ организма. Среди преимуществ ИФА в сравнении с другими методами диагностики можно выделить высокий уровень технологичности, что уменьшает вероятность ошибок. Метод является высокочувствительным и применяется для диагностики заболеваний как у детей, так и у взрослых. Существует обширное количество различных модификаций ИФА.

Метод ИФА основывается на специфичности иммунохимических реакций, а также физико-химических закономерностях реакций комплексов антиген-антитело. Реакции производятся с участием специфических ферментов, которые являются метками для определения антител. В результате иммунохимической реакции строго определенные антитела связываются с соответствующими антигенами. Исследование крови методом иммуноферментного анализа почти исключает возможность получения ложноположительного результата. О положительном или отрицательном результате специалисты лабораторной диагностики судят исходя из того, произошло ли окрашивание раствора в ходе ферментативной индикации комплекса антиген-антитело. Если раствор окрасился, то произошло взаимодействие антигена с антителом, результат ИФА положителен.

Какие заболевания можно выявить методом ИФА

Исследование методом иммуноферментного анализа позволяет:

• выявить ряд инфекционных заболеваний;
• диагностировать аутоиммунные заболевания;
• выявить наличие онкологии;
• определить гормональные нарушения;
• произвести иные исследования.

Анализ крови методом ИФА позволяет определить наличие следующих инфекций:

Метод применяется для выявления антигенов возбудителей ряда инфекций, а также для выявления антител различных классов. Большую популярность метод ИФА получил для выявления сифилиса, ВИЧ, вирусных гепатитов. Определять наличие и уровень антител в сыворотке крови с целью первичной диагностики ИППП не рекомендуется. В данном случае наличие антител в крови может быть лишь признаком того, что организм пациента контактировал с возбудителем инфекции в прошлом.

Диагностика различных аутоиммунных заболеваний методом ИФА производится посредством исследования:

• антинуклеарных тел;
• антител к двухспиральной ДНК;
• антител к растворимым нуклеарным антигенам (ENA скрин);
• антикардиолипиновых антител;
• IgG к цитрулиновому пептиду;
• ревматоидного фактора;
• С-реактивного белка;
• аутоантител к цитоплазматическим антигенам нейтрофилов (ANCA скрин).

Специфические иммунные комплексы характерны для определенных аутоиммунных заболеваний. Например, антитела двуспиральной ДНК являются характерными для такого заболевания, как системная красная волчанка.

Определение онкологических заболеваний производится при иммуноферментном исследовании сыворотки крови на специфические онкомаркеры, такие как ПСА, СА-125.

ПСА свидетельствует о наличии аденомы простаты и рака простаты. СА-125 - это онкомаркер злокачественной опухоли яичника. Значение повышается и при раковых опухолях матки, молочных желез, эндометрия.

Подготовка к анализу

Чтобы обеспечить максимальную точность результатов, нужно следовать определенным правилам подготовки к исследованию. Анализ для лабораторной диагностики методом ИФА, как правило, сдается утром из локтевой вены. Сдавать кровь необходимо строго натощак. Кроме этого простого предписания, следует выполнять следующие рекомендации по подготовке:

• за 24 часа до исследования необходимо исключить прием алкоголя и курение;
• избегать тяжелых физических нагрузок;
• пребывать в спокойном состоянии;
• избегать нервного напряжения;
• сдавать кровь на ИФА не ранее, чем через 10 дней после отмены лекарств;
• предупредить врача о приеме необходимых лекарств.

Кроме того, за несколько дней до сдачи анализа рекомендуется придерживаться диеты. При этом из рациона исключить жирные продукты, жареную пищу. Перед анализом на вирусные гепатиты из рациона исключить не только жирное и жареное, но и цитрусовые, а также оранжевые овощи.

Следует отметить, что на результаты определенного спектра гормональных исследований влияет такой фактор, как фаза менструального цикла. Необходимость сдавать анализ в ту или иную фазу менструального цикла следует заранее обговорить с лечащим врачом. В противном случае можно получить неожиданные показатели. Так, например, нормальный уровень лютеинизирующего полового гормона у женщин варьируется в зависимости от дня цикла:

• 1-12 день - 2-14 мЕд/л;
• 12-14 день - 24-150 мЕд/л;
• с 15 дня до начала нового цикла - 2-17 мЕд/л.

Расшифровка результатов ИФА

Анализ позволяет установить наличие в организме антител различных классов. Существуют антитела 3 классов:

Выработка этих антител происходит на различных стадиях заболевания. Самыми первыми после заражения в организме начинают вырабатываться антитела IgM. Их наличие является показателем болезни в любом случае. В организме здорового человека этот класс антител отсутствует.

Эти иммуноглобулины присутствуют в сыворотке крови около 5-6 недель.

Иммуноглобулины класса G, присутствующие в крови, говорят о том, что человек либо уже перенес заболевание, либо является носителем инфекции. Эти антитела начинают вырабатываться после антител класса М, при большинстве заболеваний на 3-4 неделю после заражения. Их присутствие в организме возможно в течение нескольких лет. А при некоторых болезнях (например, сифилисе) IgG присутствуют в крови пожизненно.

Если в организме присутствуют IgA, необходимо как можно интенсивнее бороться с инфекцией. Антитела этого класса появляются лишь в случае хронического инфекционного заболевания. Исчезновение IgA говорит об уничтожении инфекции.

Если анализ ИФА производится в детском возрасте до 1,5 лет, должна учитываться следующая особенность: кровь ребенка содержит IgG матери к различным инфекциям. Это совсем не означает, что ребенок болен. В таком случае это скорее норма. Наличие IgM является свидетельством внутриутробной инфекции либо инфекции, приобретенной уже после рождения. IgM матери не могут проникнуть в организм ребенка через плаценту.

В таблице представлены возможные комбинации наличия или отсутствия в организме антител 3 классов и их интерпретации.

При расшифровке анализов (+) свидетельствует о положительном результате, а (-) говорит об обратном, то есть об отрицательном. Результат, показывающий наличие или отсутствие какого-либо вещества в организме, называется качественным. Он может быть дополнен количественным. Количественный результат отображает количественное содержание различных веществ в организме.

Стоит отметить, что тест-системы имеют собственные, определенные изготовителем, референтные значения, которые характеризуют показатели. Превышения референтных значений, как правило, означают наличие тех или иных патологий в организме исследуемого.

После получения результатов ИФА расшифровку полученных значений должен производить лечащий врач. Только он сможет произвести правильную оценку полученных результатов и определить стадию заболевания.

Вконтакте

В онлайн-лаборатории Lab4U мы хотим, чтобы каждый из вас мог заботиться о своем здоровье. Для этого мы просто и понятно рассказываем о показателях организма.

В онлайн-лаборатории Lab4U делаются серологические исследования для обнаружения антигенов возбудителя и специфических антител к ним - это самый точный метод диагностики инфекционных заболеваний. «Зачем надо сдавать анализ на антитела для диагностики инфекций?». Такой вопрос может возникнуть после направления врача в лабораторию. Попробуем на него ответить.

Что такое антитела? И как расшифровать результаты анализа?

Антитела - это белки, которые иммунная система вырабатывает в ответ на проникновение инфекции. В лабораторной диагностике именно антитела служат маркером проникновения инфекции. Общим правилом подготовки к анализу на антитела является сдавать кровь из вены натощак (после приема пищи должно пройти не менее четырех часов). В современной лаборатории сыворотку крови исследуют на автоматическом анализаторе с использованием соответствующих реагентов. Иногда серологический анализ на антитела является единственным способом диагностики инфекционных заболеваний.

Анализы на инфекции могут быть качественными (дают ответ, есть ли инфекция в крови) и количественными (показывают уровень содержания антител в крови). Норма антител для каждой инфекции своя (для некоторых их не должно быть совсем). Референсные значения (показатели нормы) антител можно получить с результатом анализа.
В онлайн-лаборатории Lab4U можно сдать за один раз и

Различные классы антител IgG, IgM, IgA

Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig (G, A, M). Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний. Самые распространенные методы диагностики инфекций - это тесты на антитела класса IgM (острая фаза течения инфекции) и антитела класса IgG (устойчивый иммунитет к инфекции). Эти антитела определяют для большинства инфекций.

Однако, один из самых распространенных анализов - не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств. Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз.

Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом 1-4 недели.

Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых.

Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.

Антитела IgM

Их концентрация повышается вскоре после заболевания. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после его начала и достигают пика в промежутке от одной до четырех недель, затем снижаются до диагностически незначительных уровней в течение нескольких месяцев даже без проведенного лечения. Однако, для полной диагностики недостаточно определения только антител класса М: отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.

Антитела IgM имеют большое значение в диагностике и детских инфекций (краснуха, коклюш, ветрянка), легко передающихся воздушно-капельным путем, так как важно как можно раньше выявить заболевание и изолировать заболевшего.

Антитела IgG

Основная роль антител IgG - это длительная защита организма от большинства бактерий и вирусов - хотя их выработка происходит более медленно, но ответ на антигенный раздражитель сохраняется более устойчивым, чем у антител класса IgM.

Уровни антител IgG повышаются медленнее (через 15-20 дней после начала заболевания), чем IgM, но остаются повышенными дольше, поэтому могут показывать давно текущую инфекцию при отсутствии IgM АТ. IgG могут находиться на низком уровне в течение многих лет, но, при повторном воздействии того же антигена, уровень антител IgG быстро повышается.

Для полной диагностической картины необходимо определить антитела IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA, подтверждение осуществляется определением IgM. В случае положительного результата и для точной диагностики второй анализ, сделанный через 8-14 дней после первого, должен быть проверен параллельно для определения роста концентрации IgG. Результаты анализа должны интерпретироваться в комплексе с информацией, полученной в других диагностических процедурах.

Антитела IgG, в частности, используются для диагностики - одной из причин язвы и гастрита.

Антитела IgA

В сыворотке появляются через 10-14 дней после начала заболевания, и вначале их даже можно обнаружить в семенной и вагинальной жидкостях. Уровень антител IgA обычно снижается к 2-4 месяцу после инфицирования в случае успешного лечения. При повторном инфицировании уровень антител IgA вновь возрастает. Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это - признак хронической формы инфекции.

Анализ на антитела в диагностике TORCH-инфекций

Аббревиатура TORCH появилась в 70-х годах прошлого столетия, и состоит из заглавных букв латинских названий группы инфекций, отличительной особенностью которых является то, что при относительной безопасности для детей и взрослых, TORCH инфекции при беременности представляют чрезвычайную опасность.

Нередко, заражение женщины инфекциями TORCH-комплекса во время беременности (наличие в крови только антител IgM) является показанием для ее прерывания.

В заключение

Иногда, обнаружив в результатах анализа антитела IgG, например, токсоплазмоза или герпеса, пациенты приходят в панику, не посмотрев на то, что антитела IgM, которые показывают наличие текущей инфекции, могут отсутствовать вовсе. В этом случае анализ говорит о перенесенной ранее инфекции, к которой выработался иммунитет.

В любом случае, интерпретацию результатов анализа лучше доверить врачу, и с ним же в случае необходимости определиться с тактикой лечения. А сдать анализы вы можете доверить нам.

Почему быстрее, удобнее и выгоднее сдавать анализы в Lab4U?

Вам не нужно долго ждать в регистратуре

Все оформление и оплата заказа происходит онлайн за 2 минуты.

Путь до медцентра не займет более 20 минут

Наша сеть вторая по величине в Москве, а еще мы есть в 23 городах России.

Сумма чека не шокирует вас

Постоянная скидка в 50% действует на большинство наших анализов.

Вам не придется приходить минута-в-минуту или ждать в очереди

Сдача анализа происходит по записи в удобный промежуток времени, например с 19 до 20.

Вам не придется долго ждать результатов или ходить за ними в лабораторию

Мы пришлем их на эл. почту в момент готовности.